pSP72质粒和pBB14或pCMVEGFPspectrin共转染细胞后,GFP阳性细胞的细胞周期结果与GFP阴性细胞结果基本一致,说明单纯转质粒对细胞的周期没有明显影响。
3 讨论
由于绿色荧光蛋白非常易于观察和检测,因此,其已经成为转基因研究中的重要指示分子。目前对于共转基因用于检测目的基因对于细胞周期的影响,不管是采用质粒法还是病毒载体法,在进行细胞固定处理时都有绿色荧光蛋白的泄漏,因此有效的保持转基因细胞的GFP不丢失是非常重要的。尽管有作者尝试优化细胞固定处理的过程,但是效果并不理想,而且这也增加了处理细胞的难度[5]。我们的研究结果表明pBB14和pCMVEGFPspectrin转基因后的细胞经过常规的细胞周期检测处理过程后,GFP阳性细胞数尽管较对照组有轻度下降,但是仍维持非常高的水平,完全可以达到区分转基因和未转基因细胞的目的,而且pSP72质粒和pBB14或pCMVEGFPspectrin共转基因后,对细胞的周期没有明显的影响,这就说明转入目的基因后可以观察到细胞周期的变化,我们使用该方法观察了新克隆的一些基因对细胞周期的影响,取得了理想的效果。通过我们的研究和国外学者的研究均表明,共转染携带膜定位信号肽的GFP融合蛋白的质粒用于检测目的基因对靶细胞的影响是一种非常简便、效果理想的方法
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