在基因功能研究过程中,常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达( transient expression ),以流式细胞仪检测细胞周期的变化,观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同,转基因的效率也不同,往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因
网站地图本站论坛
高级搜索收藏本站
  • 表达EGFP的质粒和目的基因共转染用于检测目的基因对细胞周期的影响

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-12-17    本站论坛
pSP72质粒和pBB14pCMVEGFPspectrin共转染细胞后,GFP阳性细胞的细胞周期结果与GFP阴性细胞结果基本一致,说明单纯转质粒对细胞的周期没有明显影响。

3 讨论

由于绿色荧光蛋白非常易于观察和检测,因此,其已经成为转基因研究中的重要指示分子。目前对于共转基因用于检测目的基因对于细胞周期的影响,不管是采用质粒法还是病毒载体法,在进行细胞固定处理时都有绿色荧光蛋白的泄漏,因此有效的保持转基因细胞的GFP不丢失是非常重要的。尽管有作者尝试优化细胞固定处理的过程,但是效果并不理想,而且这也增加了处理细胞的难度[5]。我们的研究结果表明pBB14pCMVEGFPspectrin转基因后的细胞经过常规的细胞周期检测处理过程后,GFP阳性细胞数尽管较对照组有轻度下降,但是仍维持非常高的水平,完全可以达到区分转基因和未转基因细胞的目的,而且pSP72质粒和pBB14pCMVEGFPspectrin共转基因后,对细胞的周期没有明显的影响,这就说明转入目的基因后可以观察到细胞周期的变化,我们使用该方法观察了新克隆的一些基因对细胞周期的影响,取得了理想的效果。通过我们的研究和国外学者的研究均表明,共转染携带膜定位信号肽的GFP融合蛋白的质粒用于检测目的基因对靶细胞的影响是一种非常简便、效果理想的方法

上一篇:怎样研究植物抗病反应的分子机理   下一篇:流式细胞术检测凋亡的技术问题和常见问题解答

共10页: 上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 7 [8] [9] [10] 下一页

推荐文章
 
相关文章
推荐专题

↑返回顶部   打印本页   关闭窗口↓  
 本站申明 联系我们 网站地图
Copyright© 试验方案

Powered by DedeCms email:htmyth#yahoo.com.cn QQ:386836509

Optimized to 1024x768 to Firefox,Opera and MS-IE6