在基因功能研究过程中,常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达( transient expression ),以流式细胞仪检测细胞周期的变化,观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同,转基因的效率也不同,往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因
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  • 表达EGFP的质粒和目的基因共转染用于检测目的基因对细胞周期的影响

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-12-17    本站论坛
4避光染色1小时。利用该型号流式细胞仪具有区分黏附成团细胞的功能,以CellQuest软件获取细胞。GFP和PI的检测分别采用FL1通道(530/30nm)和FL2通道(572/26nm)。采用单纯标记PI的细胞、单纯表达GFP的细胞和表达GFP同时PI染色的细胞进行FL1和FL2通道的荧光补偿调节。FL1通道采用对数值,FL2通道采用线性值。以CellQuest和Modifit LT软件进行细胞周期分析。在FL2-width和FL2-Area散点图设门,区分单细胞和聚集成团细胞,以FL1直方图设门分析GFP阳性细胞,以FL2-Area直方图分析细胞周期。

2 结果

2.1 75%乙醇固定后对细胞绿色荧光蛋白的影响

三种质粒pBB14pCMVEGFPspectrinpEGFPN-1在和pSP72质粒共转后48小时荧光显微镜下观察均可见到绿色荧光。流式细胞仪检测对照管和固定管的绿色荧光蛋白表达,典型结果见图1pBB14

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