DNA显示和细胞有丝分裂相的观察
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  • DNA显示和细胞有丝分裂相的观察

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-04-05    本站论坛
核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。它们在细胞内的分布及化学性质均有所不同。DNA主要分布在核的染色质或有丝分裂过程中出现的染色体内。RNA分布在细胞质和核仁内。但在染色质及染色体中也含有少量的RNA,核仁中也有少量的DNA。在线粒体,叶绿体等细胞器内除含有RNA外,也含有少量的DNA。
 
一、             目的与要求
了解Feulgen反应的基本原理,学习其操作方法和压片法,初步掌握细胞分裂各期的主要特点。
 
二、             原理
Feulgen反应的原理是根据DNA经弱酸(1mol/L)水解后,打开料嘌呤和脱氧核糖连接的键,在脱氧核糖的一端形成有离的醛基。这些醛基就在原位与Schiff试剂结合,形成含醌基(        )的化合物,醛基是一个发色团所以具有颜色,因此凡有DNA的部位,就呈现紫红色。
 
三、             实验内容
1.  的显示法-Feulgen反应DNA
2.  压片法
3.  细胞有丝分裂相的观察
 
四、             实验步骤
(一)   的显示法-Feulgen反应DNA
以蚕豆根尖或洋葱根尖为材料,进行Feulgen反应的具体操作程序如下:
 
切取根尖
   长度0.3-0.5cm
 
Camoy固定剂
   固定10-30分钟
 
95%酒精
   10分钟
 
70%酒精
↓ 10分钟
 
蒸馏水 →(对照) 5%三氯醋酸
                 ↓90oC 15分钟
1mol/L HCl ←    蒸馏水
   室温
 
1mol/L HCl
↓ 60 oC 8分钟
Schiff试剂
↓ 40 -60分钟
 
亚硫酸水(1,2,3)
  换3次,每次5分钟
 
自来水
  将染色后的根尖漂洗干净,悬着染色效果好的材料
 
蒸馏水
 
压片

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