细胞介导细胞毒作用检测法6：荧光法检测CMC

荧光法检测CMC

1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×10⁵/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×10⁶/ml浓度。

2．取96孔圆底细胞培养板，每孔加0.1ml K562细胞悬液；每孔加适量PBMC使效靶比为1：1～5：1，每种处理3个复孔；3个对照孔只加效应细胞；8个对照孔只加靶细胞；4个对照孔只加细胞培养液。每孔加20μl Alamar Blue；每孔总量为0.2ml。

3．在37℃ 5％ CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24小时。

4．直接在荧光检测仪上检测荧光强度，激发波长530nm，发射波长590nm。各孔荧光强度值应减去培养液对照荧光强度的平均值，各复孔荧光强度的平均值记为AF。按下式计算特异性杀伤百分比：

特异性杀伤（％）＝100×[AF靶细胞对照－（AF实验孔－AF效应细胞对照）]/AF靶细胞对照

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