• 酵母遗传学方法8：酵母活体染色

• 点击：    作者：   来源： 日期：2006-11-09    本站论坛

酵母活体染色

1）核DNA和线粒体DNA

1．当细胞培养到约10⁷细胞/ml时，离心（5秒）收集细胞，再悬浮在70％乙醇中。

2．固定5分钟或5分钟以上，用水洗2次。

3．将细胞悬浮在含有50ng/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中。1mg/ml的4，6-二脒基-2苯基吲哚母液可在－20℃下贮存。

4．用紫外滤片观察。

 

2）线粒体

1．在生长培养基中培养细胞达到约10⁷细胞/ml时，加入100ng/ml 3，3’-二已基噁羰花青碘化物（DiOC₆，Sigma D₃₆₅₂或Molecular Probes）用乙醇把1mg/ml母液稀释到1/10⁴。

2．培养5分钟或5分钟以上，用荧光素滤片观察。

 

3）液泡

1．当细胞生长到约10⁷细胞/ml时，离心收集细胞（5秒），悬浮在含有50mmol/L柠檬酸钠（pH4.0）的YPD中。

2．加CDCFDA（羧基-2’,7’-二氯-荧光素双乙酸盐）到终浓度为10μmol/L。

3．保温10分钟或10分钟以上，用荧光滤片观察。

4）牙痕和几丁质

1．用生长培养基培养细胞达10⁷细胞/ml时，加100μg/ml Calcofluor（荧光发光剂28；Sigma F3543）（用水将1mg/ml母液稀释到1/10，母液可在－20℃下黑暗保存数星期）。

2．培养5分钟或5分钟以上，用水洗2次，用紫外滤片观察。