细胞生长检测1：[3H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数

[³H]脱氧胸苷摄入法测定细胞数

1．用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期（培养3天）的CTLL-2细胞两次，每次250×g离心10分钟，洗去培养液中残存的IL-2。

2．用台盼蓝（1％ Trypan blue）染色法计数细胞并决定细胞的活力，用10％小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1×10⁵/ml。

3．在96孔细胞培养板中每孔加0.1ml倍比稀释的标准IL-2或待测样品，每个稀释度三个复孔，标准IL-2从40 IU/ml稀释到0.019 IU/ml（8～10个稀释度），阴性对照孔不加IL-2。

4．每孔加0.1ml细胞悬液，在37℃ 5％ CO₂的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养18～24小时。每孔加10μl（0.5μCi或1.85×104Bq）[³H]脱氧胸苷，继续培养4小时。

5．用多头细胞收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上，用3％醋酸水溶液滤纸3次，洗去游离的[³H]TdR。将滤纸置液体闪烁瓶中，加入5ml闪烁液。在液体闪烁仪上计数细胞摄入的同位素活性（每分钟放射性计数，cpm），根据仪器效率换算成dpm（每分钟衰变数）。

6．用dpm值对样品稀释倍数作图。在图上，标准IL-2的曲线与待测样品的曲线应当呈平行的S型，说明是同样的分子反应。比较同样dpm处的不同稀释倍数，决定待测样品的相应浓度。

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