染色体扫描电镜标本制备及观察-试验方案

染色体扫描电镜标本制备及观察
点击： 作者： 来源： 日期：2006-11-09 本站论坛

一、原理扫描电镜用于观察标本的表面形态。用戊二醛和锇酸处理的染色体标本，经单宁酸(或硫卡巴肼)还原可获得较好的导电染色效果。在扫描电镜下可观察到染色体的三维结构，也可用于常规染色体核型、G带染色体核型、高分辨染色体核型的分析及染色体结构异常识别，以弥补光镜的许多不足。在扫描电镜下还可清楚地观察到肿瘤细胞癌基因扩增结构—双微体。因而此方法广泛用于细胞生物学和遗传学的许多研究。二、染色体标本制备的方法 1．常规染色体标本制备，同实验十。 2．取一张在光镜下观察过的染色体标本片选择分散良好的分裂相，并在背面做出标记以便电镜观察时易于寻找。 3．3:1甲醇一冰乙酸脱色，用磷酸缓冲液洗。 4．2.5％戊二醛固定30分钟。 5．0.1mol／L(pH7.4)PBS漂洗3次。 6．1％锇酸固定5分钟。 7．蒸馏水洗3次。 8．2％单宁酸处理5分钟。 9．蒸馏水洗3次。 10．1％锇酸处理lO分钟。 11．水洗3次。 12．30％→100％乙醇逐级脱水，每级5分钟。 13．临界点干燥(也可用空气干燥)。 14．把标本片标记的核型所在处用玻璃切下约5×5mm²，用导电胶固定在标本台上。 15．离子镀膜(也可不镀膜直接观察)。 16．扫描电镜观察、照相。三、染色体形态观察低倍观察可见染色体的不同分裂相，在分散较好的分裂相中，染色体呈三维立体形态。高倍观察染色体呈长短不等的园柱状，两条单体由着丝粒相连，其表面凹凸不平，沿纵轴有许多环形沟把染色体分成许多节段。可见染色体表面由许多细纤维构成。