原位末端转移酶标记技术检测凋亡

(三)酶标记法

1.材料与试剂 采用美国Oncor公司ApopTag^TM-Peroxidase试剂盒，包括：

⑴ 过氧化物酶标记的抗地高辛抗体

⑵ 反应缓冲液

⑶ TdT酶

⑷ 反应终止/洗涤液

⑸ 平衡缓冲液

⑹ 蛋白酶K消化液：20μg/ml蛋白酶K溶于PBS。

⑺ 30% H₂O₂

⑻ DAB显色液：0.05%的diaminobenzidine(DAB)溶于PBS，用前过滤并加入

0.02% H₂O₂。

⑼ 甲基绿染液：0.5%甲基绿溶于0.1Mol/L枸橼酸钠，pH调整到4.0。

⑽ 塑料盖玻片及玻璃盖玻片

2．样品 同荧光标记法。

3．操作方法

⑴ 固定：同荧光标记法。

⑵ 内源性过氧化物封闭 玻片置于盛有0.5% H₂O₂缓冲溶液的染色缸内，室温下作用20min后，同荧光标记法洗涤。