⑵ 贴壁生长的培养细胞
⑶ 冰冻切片
⑷ 常规石蜡切片
3.操作方法
(1)固定:培养细胞的制片或冰冻切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后,用80%酒精再固定2h(-20℃)。常规4%中性福尔马林固定、石蜡包埋之切片进行脱蜡、水化。
(2)洗涤:玻片浸入PBS缓冲液,摇床上洗涤5min,三次。
(3)反应:洗涤后的玻片用吸水纸吸干细胞或组织周围水分,按50μl/㎝2滴加反应液(每50μl反应液含TdT酶0.5μl,标记的-dUTP 1μl),使反应液均匀地覆盖于所有细胞或组织切片上,盖上塑料盖玻片,置湿盒中,37℃孵育1h。
(4)终止反应:去掉塑料盖玻片,将玻片置盛有洗涤缓冲液的染色缸内,洗涤两次,每次5min。
(5)FITC标记:洗涤后的玻片用吸水纸吸去细胞或组织周围水分,按50μl/㎝2滴加FITC反应液(含FITC 2.5μg/ml),室温下避光孵育10min。
(6)洗涤:将玻片置于洗涤缓冲液内,洗两次,每次5min。
(7)PI复染:将玻片置于盛有PI染液的染色缸内,室温下避光染色30min。
(8)封片:用盖玻片直接盖在含PI染液的玻片上,亦可用无色指甲油涂于盖玻片四周边缘,置暗盒中,尽早镜检观察。
4.结果判定:用荧光显微镜观察,选用蓝色激发光(波长488nm),所有的细
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