(一)原理 凋亡细胞是由于内源性核酸内切酶的激活后,将 DNA 切割成许多双链 DNA 片段以及高分子量 DNA 单链断裂点(缺口),暴露出大量 3- 羟基末端,如用末端脱氧核苷酸转移酶( TdT )将标记的 dUTP 进行缺口末端标记,则可原位特异地显示出凋亡细胞。主要应用的是
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  • 原位末端转移酶标记技术检测凋亡

  • 点击:    作者:51protocol收集   来源: 日期:2007-04-28    本站论坛

(一)原理

凋亡细胞是由于内源性核酸内切酶的激活后,将DNA切割成许多双链DNA片段以及高分子量DNA单链断裂点(缺口),暴露出大量3-羟基末端,如用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)将标记的dUTP进行缺口末端标记,则可原位特异地显示出凋亡细胞。主要应用的是荧光标记法和酶标记法。

(二)荧光标记法

1.材料与试剂 采用德国Boehringer-Mannheim公司In Situ Cell Death Detection 试剂盒,或美国Oncor公司ApopTagTM试剂盒,包括:

⑴生物素标记的-Dutp(Biotin-dUTP)或地高辛标记的-dUTP(Digoxingeningll-dUTP)nmol/µl

TdT酶(25U/μl

⑶ 反应缓冲液

⑷ 洗涤缓冲液

⑸ 异硫氰酸荧光素(FITC)标记的亲合素或链霉亲合素(2.5µg/ml)或抗地高辛抗体(130

PI染液(含PI 5µg/ml及无DNA酶活性的RNA0.1%

PBS缓冲液

⑻ 塑料盖玻片

2.样品

⑴ 悬浮生长培养细胞的甩片或涂片

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