用寡核苷酸探针检测组织切片中的RNA原位杂交- 点击： 作者： 来源： 日期：2007-04-04 本站论坛
,将杂交体中A残基数与T残基数和乘以2℃,再将残基G与C残基数的和乘以4℃,两积相加便得出杂交体的Tm值.但对于含有较长寡核苷酸的杂交体,采用此法结算的Tm值偏高.
注意事项
1. 去离子甲酰胺的浓度(deionized formamide dF)为47%,过高和过低甲酰胺的浓度都
会影响杂交结果,当去离子酰胺浓度高于或低于47%,应加ddH2O调整,并根据Longetal
1992年报导,计算去离子甲酰胺百分比公式为: %dF=%GC=寡核苷酸G+C碱基量的百分比,L=寡聚核苷酸探针长度,%mismatch=寡核苷酸不能与靶核苷酸配对碱基的百分比,47=杂交温度+10℃(在37℃下).
2. 杂交液内加入变性剪切的鲑鱼精子DNA在杂交前加入,与其它杂交液分开储存.
3. 杂交液能在-20℃保存几个月.
(六)杂交后处理
1. 将切片置37℃ 2×SSC中漂洗2×10min. 2. 在37℃ 2×SSC 漂洗2×15min,1×SSC
漂洗2×15min,0.25×SSC 漂洗2×15min均需用振荡漂洗切片.
(七)免疫检测及显色
1. Buffer A PH7.5(0.1mol/L Tris,1mol/L NaCl,2mmol/L MgCl2,500μl Tween 20)
冲洗,漂洗各3×5 min.
2. 用DAKO魔笔沿组织周围划圈,每张切片滴加Streptavidin-AP(
上一篇：cRNA探针检测组织切片中的RNA原位杂交 下一篇：用cDNA探针检测体外培养细胞中的RNA原位杂交 共5页: 上一页 [1] [2] 3 [4] [5] 下一页 |
