用Trizol 抽提的RNA，用琼脂糖凝胶电泳，出现许多条带(至少四条以上)，是哪些原因导致的？
参考见解：
1、 是从组织里抽的还是细胞抽的？组织的RNA电泳不理想，但目的条带仍能跑出来。细胞的电泳相当漂亮，但有时逆转录效果反而不好。组织经常出现这种情况，组织抽提的RNA不纯，而且多多少少有降解。不过下一步可以接着做逆转录，可能对后面的实验影响不会很大。
2、 是mRNA的话，这样的效果挺不错的。如果是总RNA，那是降解了。不过细胞的RNA应该不容易降解，可以上样少点再跑胶。
3、 可以试试在70度加热5分钟,然后再跑跑电泳可能有意想不到的结果.
4、 建再进行RNA精致的过程,也就是Trizol后,加氯仿,吸取上清尽量少吸,然后将其再按规程离心一次吸取上清后加入异丙醇,然后再用70%冰乙醇洗两次可见RNA,如果还是不行的话最好用柱式吸附柱将上清与70%冰乙醇混合后过柱怀疑这种属于基因组DNA污染在操作过和的preeogress降解.所以一定要按规程进行抽提.
胰腺组织RNA提取时在研磨时总是粘在研钵，怎么处理？有什么好的方法吗？
参考见解：取出胰腺组织后立刻浸入液氮中，然后将其转移至研钵中（研钵要经180度干烤4－8小时，除去RNAase），持续研磨，一边研磨一边加液氮，研磨成粉末。此时要注意液氮的补充，如果组织化开就会出现组织粘在研钵内的情况。 研磨成粉末后加入Trizol，此时，由于低温Trizol也会冻住，持续研磨至Trizol化开并澄清亮，就可以了。然后离心，进行下面的步骤。
也可以使用匀浆器，很便宜，也很简单。当然要经去处RNAase处理。在冰上将组织研磨成匀浆即可。
所有的准备工作如干烤、DEPC浸泡等均按分子克隆上说的处理了，可是就是提取不出RNA来。异丙醇沉淀后在管底也有乳白色的东西，用DEPC水溶解却溶解不了，很粘稠。电泳什么也看不见。用的组织是小鼠的肺和脾脏，TRIZOL用的是GIBCOL的。组织和TRIZOL的比例为每50mg用1ml TRIZOL。为什么？
参考见解：乳白色的东西有可能就是RNA,一定要溶解,实在不行就在70%乙醇洗过后迅速空气干燥一下,加DEPC水,还溶解不了就65度加热10分钟.好象100mg组织加1mlTRIZOL足够了。
提取酵母的总RNA都用什么方法？有好用的试剂盒吗？酵母总RNA提取应该注意什么？
参考见解：使用热酚法抽提酵母RNA,很好用。
1、 将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中，30℃过夜旋转培养。
2、 稀释过夜培养的菌液，重新在10ml培养基中培养细胞。
3、 ?OD600达到1.0时，收菌，4000rpm/min离心5min,弃培养基。
4、 将细胞悬浮于400μl AE缓冲液（50mM Sodium Acetate,10mM EDTA 调整pH值至5.2）。
5、 ?加入1/10体积的10% SDS，充分混合。 加入等体积在65℃预热的酸性酚（pH4.5），混合。
6、 ?65℃加热5min，冰上放置10min。在室温下8000rpm/min离心10min。
7、 ?取水相,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1），10000rpm/min离心8min。
8、 取水相，加入等体积氯仿/异戊醇（49∶1）10000rpm/min离心8min。
9、 加入1/10体积3M pH5.2的醋酸钠，2.5倍体积的纯乙醇，-20℃过夜沉淀。
10、 沉淀样品于4℃离心5min，去除液体。
11、 在冰上干燥RNA（放置15min），最后用适量DEPC水溶解RNA。
贴壁细胞消化后可不可以离心后加入Trizol呢？有影响吗？
参考见解:可以，用少量PBs重悬，然后用trizol提取，不过提取要快，不能存放，因为细胞为活体，表达受外界环境影响，要是已经存放了两小时，建议重做。
在没有液氮的条件下，直接研磨组织成粉末再加入TRizol中，对RNA提取的质量会不会影响很大？或者在研磨过程中直接加入TRizol研磨直到成粉末，这样可不可取？
参考见解：在没有液氮的条件下，直接研磨组织成粉末再加入TRizol中，这样RNA早就没有了。
要是在研磨过程中直接加入TRizol研磨直到成粉末，可以观察组织,看研磨得什么样子了,磨的差不多时加trizol,可试一下,镜下观察然后确定加入trizol试剂。
用Tiangen的TRNzol提的月见草（柳叶菜科）叶片RNA，跑电泳结果发现RNA已经降解了。后换了烟草的叶片，同样的提取，出现18s,和28s的两条带，结果比月见草好。但是没有到18s:28s=2:1的程度。而且下面还有多出来的条带，不知道是5s，还是降解了的RNA。下面是电泳图，第二道是烟草总RNA，OD260/280=1.82，第三道是月见草总RNA，OD260/280=3.05。普通琼脂糖胶0.8%，130v,20min请问：
1.烟草的RNA的结果足够做RT-PCR了吗？想分析的是叶绿体上的几个基因。
2.想换用TRNzol以外的RNA提取试剂和方法试试。或者换用其它品牌的TRNzol。不同的物种差异还是很大，提月见草时沉淀出的RNA有浅浅的紫色，不知道是否有什么物质影响了RNA的提取。
参考见解：
从电泳图分析：
1、 月见草的RNA已经降解了。
2、 烟草的RNA可以做RT-PCR，质量和纯度都不错。“下面还有多出来的条带”应是叶绿体RNA,是在植物RNA提取中常见的情况.
3、 不用换Trizol，把条件控制严一点，应该能提得好的，多摸摸条件。
4、 用过Qiangen的RNA Easy效果极好.天为时代的RNA Plant也不错,只是试剂味道大了点. 听说天为时代现在好像也有与Qiagen RNA Easy类似的盒子.不过RNA Easy系列的试剂盒提取某些植物会有微量基因组DNA污染, 需RNase free的DNase处理.用过inventroge TRizol,效果不错.
冻存细胞与新鲜细胞的RNA提取有区别吗？具体该怎么操作？
参考见解：新鲜细胞与冻存细胞RNA提取没什么区别。千万不能等细胞溶解了存状态把Trizol直接加到冻存管了，一起化开，振荡振荡就可以了。与从组织中提RNA 差不多。
做软骨组织的RNA提取，应当怎样开始试验？
参考见解：
1、 按RNA提取的要求处理研钵。
2、 研钵中加入液氮。
3、 将软骨组织放入盛有液氮的研钵内。
4、 研碎软骨，液氮蒸发完时加入适量的Trizol。
5、 待Trizol试剂恢复液态后吸入EP管中。
6、 然后按常规方法提取RNA。
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