RNA纯化
网站地图本站论坛
高级搜索收藏本站
  • RNA纯化

  • 点击:    作者:   来源: 日期:2007-10-24    本站论坛
试验步骤:
用酚氯仿抽提:这两种有机溶剂合用,比单独用酚抽提的除蛋白效果更佳。继而用氯仿抽提则可除去核酸制品中的痕量酚,先加入酚后加入氯仿。
1、 核酸样品置有盖小离心管中,加入等体积的酚/氯仿(如有20ul样品,则加入10ul酚10ul氯仿)。
2、 旋涡混匀管内容物,使呈乳状。
3、 12000×g室温离心15秒。
4、 水相移入另一离心管,弃去两相界面和有机相。
5、 重复步骤1-4步操作,直至两相界面上见不到蛋白质为止
6、 按下述核酸浓缩法沉淀回收核酸。
7、 2-8度,离心,10500rpm/min,15min,取上清,用200ul在20ul刻度使用,小心不要使界面混淆,剩余界面上不要)。
8、 上清中加入等量的异丙醇(一般是0.5:1),颠倒5次(用200ul枪加小心),室温静置10min。
9、  2-8度离心,10500rmp/min,10min,弃上清。
10、 RNA洗涤:75%酒精(这次用的100%。未影响)1ml沉淀,轻轻弹其底部(直接放入-70度冰箱可以长期保存,静置几秒钟。
11、 2-8度离心,8500rpm/min,5min ,弃上清。
12、 取出滤纸,将EP管敞开放在滤纸上,管口向酒精灯(不要完全干燥,不好溶解)。
13、 ?DEPC水溶解(30ul,可变),分装,2ul电泳,2ul比色,其余5ul分装至于手套中冻于-20度中。

上一篇:一些特殊组织的RNA提取   下一篇:动物组织mRNA的提取

推荐文章
·提取常见问题分析
·针对RNA酶的一些注意事项
·RNA提取注意事项
·mRNA纯化
·植物组织mRNA提取
·动物组织mRNA的提取
相关文章
推荐专题
 

↑返回顶部   打印本页   关闭窗口↓  
 本站申明 联系我们 网站地图
Copyright© 试验方案

Powered by DedeCms email:htmyth#yahoo.com.cn

Optimized to 1024x768 to Firefox,Opera and MS-IE6