植物RNA提取中的一些特殊方法
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植物RNA提取中的一些特殊方法

点击：   作者：   来源：  时间： 2007-10-24 　本站论坛



改良Krapp提取法：
试验试剂：
1、 RNA抽提掖：母液：4mol 异硫氰酸胍 20mmol EDTA  20mmol MES pH 7.0。工作液：取400ml母液加入1.7ml 2-ME贮存在4℃条件下备用。
2、 RNA重悬液：2mol LiCl  10mmol NaAc调整终体积为250ml，pH 5.2，灭菌后贮存在4℃条件下备用。
试验步骤：
1、 取新鲜植物材料0.5~1g，冷冻干燥。如果必要可加入0.2g砂一起研磨，然后加入 10ml RNA抽提掖充分混匀。
2、 4℃条件下8000rpm离心10min，将上层水相转移至一干净离心管中，加入等体积的酚/氯仿抽提掖，在4℃条件下8000rpm离心10min。
3、 上清液转移至一干净离心管中，再用10ml氯仿洗上清液1次（加入10ml氯仿充分混匀后，在4℃条件下8000rpm离心10min.）。
4、 小心将上清液转移至另一干净离心管中，加入1/10 vol 3mol NaAc和2 vol冷无水乙醇，在-80℃条件下沉淀2小时。
5、 在4℃条件下8500rpm离心30min.，小心弃去上清液，沉淀重悬于RNA重悬液中，置于4℃条件下1小时。
6、 4℃条件下8500rpm离心10min.，弃去上清液，沉淀溶于适当体积的DEOC处理水中。检测后分装，置于-70℃条件下保存。

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