动物组织核糖核酸的制备及测定

目的和要求

1 学习和掌握用苯酚法及盐溶液法从动物组织提取核酸的原理及操作技术。
2 练习从动物组织提取RNA，并鉴定纯度。

实验原理

利用苯酚法可以直接从动物组织中提取RNA，组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水层中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层加入乙醇后RNA即呈白色絮状沉淀析出。

操作步骤

1 称取3克肝组织，剪成小块，置于研钵中，加3-4滴90%的苯酚溶液后研磨，匀浆中加入15mL水，转移至三角烧瓶中，加10mL酚至三角烧瓶中。

2 室温下剧烈振荡45分钟，于3000rpm离心20分钟。

3 用吸管将上层液吸出，并加入1/2体积的氯仿-异戊醇，于低温下振荡20分钟，以除去提取液中的蛋白质，以2000rpm离心10分钟，吸出上层清液，向上清液中加入醋酸钾粉末，使最后浓度大约为2%，装入小烧杯后，一边搅拌，一边缓慢加入两倍于上清液体积的95%乙醇以沉淀RNA。

4 于冰浴中放置半小时后，以1000rpm离心5分钟，沉淀再用少量75%乙醇洗涤1-2次，收集沉淀，置于干燥器内干燥，称重。

5 测定A260/A280的值，应大于1.85，若小于1.85，则说明含杂蛋白和DNA高了。