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RNA 提取

点击： 作者： 来源： 时间： 2006-11-07 　本站论坛

TRIzol 的使用量：
样本量TRIzol（mL）使用量
10 cm2 贴壁培养细胞2
5×106 悬浮培养细胞1
1 mL 白细胞20
50 mg 普通组织样本1
50 mg 特殊组织样本（肝、脾、骨及软骨等等） 2
15 mg 植物组织（多糖和多酚含量不高的） 1
2）氯仿的使用量：
每1 mL TRIzol 加入0.2 mL 氯仿。
3）异丙醇的使用量：
每1 mL TRIzol 加入0.5 mL 异丙醇。
4） Milli-Q 水的使用量：
根据沉淀的大小确定。
2. 实验过程
2.1 细胞样本的分离和匀浆
2.1.1 全血中白细胞的分离
1) 将血液或骨髓样本中加入等体积的1×PBS 缓冲液，混匀。
2) 在一体积足够大的离心管，加入淋巴细胞分离液。
3) 取与淋巴细胞分离液等体积的样本液，将其小心注入淋巴细胞分离液液面上。
4) 4℃条件下，3000 g 离心30 min。
5) 小心吸取中间层悬浮的白细胞至一新的离心管中。
6) 4℃，8000 g 离心5 min。
7) 弃上清，在沉淀（白细胞）中加入裂解液（TRIzol），体积比1:20。
8) 匀浆至沉淀清亮透明无粘稠感。
9) 在15~30℃放置5 min。
2.1.2 贴壁培养细胞
1) 倒出培养液，用1×PBS 清洗一次。
2) 按每10 cm2 生长细胞加2 mL TRIzol，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，
用移液枪吹打细胞使其脱落（对于贴壁牢固的细胞用细胞刮刮离表面）。
3) 将裂解液及细胞转移至一离心管中，用一次性注射器反复抽打直至裂解液清澈透明不粘稠。
4) 在15~30℃放置5 min。
2.1.3 悬浮培养细胞
1) 将悬浮培养的细胞连同培养液倒入一离心管中，2000g，4℃离心20min。
2) 弃上清，加入1×PBS 1mL 轻轻吹打，1000g，4℃离心5min。
3) 弃上清，按每5×106 个细胞加入1mL TRIzol。
4) 用一次性注射器反复抽打直至裂解液清澈透明不粘稠。
5) 在15~30℃放置5 min。

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