样本制备和保存

根据我的经验，RNA 提取的失败往往由于样本制备不合理而造成的。因此我们决不能忽视样本采集的重要
性。
大家还要明确一点：处于不同发育阶段以及不同生长条件的样本中所含有的RNA 的量是可能不同的，在某
些实验条件下或某些病变部位获得的样本中RNA 的量可能与常规相应样本有显著的差异。储存条件以及储存时
间也是影响RNA 得率的关键因素，一般来说从新鲜的样本中总是能够得到预期质量的RNA，但是没有保存在液
氮或-80℃冰箱中的样品是不可靠的。即使是保存在液氮或-80℃冰箱中的样品，如果储存时间过长，或者取材时
处理不得当，RNA 质量也会显著降低。
1、组织样本的制备
1）动物组织
1) 首先准备好用于包装样本的铝箔或冷冻保存管，并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样
本编号。
2) 准确切除所需组织后，立即在冰上剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织类型。
3) 在RNase-free 的生理盐水中迅速漂洗样本，以去除血渍和污物。
4) 用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹组织，迅速投入液氮冷却。
5) 做好实验记录，写明样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。
2）临床标本
1) 首先准备好用于包装样本的铝箔或冷冻保存管，并且用油性记号笔在铝箔或冻存管外表多处写明样
本编号。
2) 准确切除所需组织后，立即在冰上剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织类型。
3) 在RNase-free 的生理盐水中迅速漂洗样本，以去除血渍和污物。
4) 用准备好的铝箔或冷冻保存管装载包裹组织，迅速投入液氮冷却。
5) 做好实验记录，写明样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。
3）植物组织
1) 准确取得所需组织后，立即用准备好的铝箔包裹组织并做好标记。
2) 立即投入液氮冷冻。
3) 做好实验记录，写明样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。
4）注意事项
1) 包裹组织的铝箔或冷冻保存管转入样本袋时，按以下步骤进行：把样本袋（纱布袋等）放入液氮中
冷冻一下，而后将液氮冷却的组织放入样本袋（每个样本袋只保存同样的组织，样本较多时应分装
至多个小袋，不要在一只样本袋中放过多的样本以防无法放入液氮罐或无法从液氮罐中取出），袋
口留一根编号绳，绳上粘标签纸（标签上注明：样本名称、编号、日期），迅速转入液氮罐。
2) 不要用Eppendorf 管保存组织样本，因为Eppendorf 管从液氮中取出时极易发生管子爆裂而造成样
本损失。

3) 在采集临床标本时，如果时间不允许进行样本清理，就立即将样本投入液氮中以确保样本的质量。
2、细胞样本的制备
1）贴壁细胞
1) 贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养液。
2) 按每10 cm2 细胞加2 mL TRIzol 试剂的比例加入TRIzol 试剂。
3) 缓慢旋转培养瓶数次，使TRIzol 试剂充分接触培养瓶表面进行消化。
4) 转移到RNase-free 的试管中用一次性注射器进行反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块，使之充分
溶解于TRIzol 中形成清亮不粘稠的液体。
5) 进行后续的RNA 提取实验或者是放入干冰或-80℃冰箱中保存。
2）悬浮细胞
1) 悬浮细胞培养诱导结束后，离心去除培养液。
2) 按照每5×106 个细胞加1 mL TRIzol 的比例加入TRIzol 试剂，用一次性注射器进行反复抽打细胞
直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解于TRIzol 中形成清亮不粘稠的液体。
3) 进行后续的RNA 提取实验或者是放入干冰或-80℃冰箱中保存。
3）全血样本的白细胞分离
1) 在已加入抗凝剂的新鲜全血中加入等体积PBS（1×），充分混匀。
2) 缓慢转入另一已加入淋巴细胞分离液的离心管中，并使上述混合液处于淋巴细胞分离液液面之上
（即两种液体不要混合，保留清晰的界面），3000 g 离心30 min。
3) 用移液枪小心分离出白细胞层；用PBS（1×）清洗白细胞，离心回收白细胞，弃去上清。
4) 加入白细胞20 倍体积的TRIzol 试剂，用一次性注射器进行反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块，
使之充分溶解并形成清亮不粘稠的液体。
5) 进行后续的RNA 提取实验或者是放入干冰或-80℃冰箱中可以保存半周左右。
4）注意事项
1) 未经TRIzol 试剂处理的细胞样本不要保存。
2) 如果样本是冻存可复苏的细胞株，应首先验证所用冻存方法用于RNA 提取的可靠性，以便确保实
验成功。
3) 血液样本保存是不稳定的，新鲜血液必须立即分离出白细胞或者直接提取RNA 进行保存。
4) 白细胞样本保存也是不稳定的，白细胞样本务必按照上述过程进行保存。
5) 不要在-20℃冰箱中保存RNA 或者白细胞样本。