与经典cDNA文库相比，用PCR 方法构建的cDNA文库周期缩短、操作快捷，使用少量组织细胞构建cDNA文库成为可能。PCR技术的建立通过把经典cDNA文库和PCR技术结合起来,建立了适用于少量RNA的PCR cDNA文库，不管是来源丰富、mRNA丰度较高的组织或细胞的cDNA文库构建，还是来源稀少、mRNA丰度极低的组织和细胞的cDNA文库构建,都有较高的成功率。PCR cDNA文库的构建方法自建立以来,经过了多方面的改进,已趋完善。因此, PCR cDNA文库已成为目前常用的cDNA文库。主要步骤有：
RNA的提取
可从细胞或组织中分离总RNA，操作中注意无RNase污染。
用逆转录酶合成cDNA第一链
PCR管中加入提取的RNA 3μg，3，随机引物(50ng /μl)1μl，RNasin(36Uμl)1μl，70℃温浴10min,冰浴中冷却5min。再加入10×逆转录缓冲液 10μl(500mmol/L Tris-HCl PH 7.6，30mmol/LMgCl2，750mmol/L KCl)。
40mmol/L焦磷酸3μl，dNTP溶液(含有4种dNTP，每种10mmol/L)3μl，AMV逆转录酶40U，加水至总体积50μl，37℃温浴2h。0.5mol/L EDTA 1μl终止反应。消化RNA，去除引物，75%乙醇再次沉淀，溶于20μl双蒸水。
加poly dG同聚尾
在DNA末端转移酶的作用下,在cDNA3，端加上poly dG尾, 0.5mol/L EDTA 1μl终止反应,用乙醇沉淀后,溶于20μl双蒸水。
PCR扩增
合成cDNA第二链，TaqDNA聚合酶进行PCR扩增, 循环参数视具体情况而定。
用琼脂糖凝胶电泳分离纯化PCR产物, 反向电压凝胶电泳浓缩产物,溶于20μl双蒸水中。
cDNA的克隆
参照传统方法进行,将PCR 产物与克隆载体连接,然后进行噬菌体的包装与转染。
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