引物合成介绍及常见问题

30.已经溶解的引物，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？

答：如果您溶解引物的水PH过低或污染了菌或核酸酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混合，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物，避免反复冻溶。建议使用10mM Tris pH7.5缓冲液溶解引物，因为因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5）, 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题，而是PCR使用材料特别是模板的质量与先前使用的不完全一致。

31.引物质量好坏的判断标准是什么？

答：合成的引物和您的定单序列一致，而不是能否扩增出您所需要的产物。

32.引物是我们设计的，现在您扩不出来，我们要负责吗？

答：不负责任。我们免费为一些实验经验不足的人员，免费设计引物。引物设计好，我们都会发给您确认。设计引物时我们遵循一般的指导原则，但是设计的引物是否能够满足您的实验要求，扩增出您需要的基因片段，我们就不能保证了。我们遇到一些用户，他们讲：引物是你们设计的，也是你们合成的，我做不出，你们就要付责任。听到这样的抱怨，觉得心寒。

33.PCR扩增不出就引物有问题吗？

答：基本不是。当今发展出各色各样的PCR扩增技术，各色各样的高温聚合酶，就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出，扩增效率低的问题。如槽式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片段。 有些重复片段的扩增, GC含量高的片段，非要采用特殊扩增手段才能扩增出了。

引物扩增不出，主要是下列两种情况比较常见（1） RT-PCR。请注意，很多基因通过常规RT –PCR方法是很难不增出来的。 RT- PCR成功的关键在于RT的反应的RNA质量和目标基因在特定组织和细胞中含量。（2）从基因组中扩增。一般情况下，基因在基因组中都是单拷贝，基因组作为模板需要严格控制用量。基因组DNA过高，会影响反应体系中的Mg和pH。

34.PCR扩增有很强的非特异条带，说明引物有污染吗？

答：不能。瞧，扩增目标很弱或没有，道是非特异性条带很亮，说明引物不纯或有污染。一些用户如是说。我们曾分析过一些非特异条带，测序发现在这些非特异性片段的两头至少可以发现一条引物序列。我们只能说非特异性扩增一般是模板污染（如RNA中污染基因组）或扩增条件不合适所致。

35.引物合成的价格合理吗，还有下浮的空间吗？

答：不合理。对引物合成的成本，我们做了准确的统计和评估，认为现阶段引物的价格处于一种非理性化状态，价格已基本探底。引物合成的成本主要由四部分组成：（1）合成原料 （2）设备折旧 （3）人员费用 （4）场地和水电等消耗。其中合成原料占生产成本占30%，设备折旧占30%，人员费用占20%，场地和水电消耗等20%。我们的合成成本控制是相当到位，原料管理也非常严格，原料进货成本不可能高于同行。现行的引物合成价格，已让我们感到十分吃力。我们需要对我们的用户负责，我们需要体现做人的准则，我们需要交税，我们需要收回设备的采购费用，我们需要给我们的用户提供配套服务，这些需要才使我们还在做引物合成。引物合成业务的利润空间可能还赶不上菜场上买鱼的.