| [19] 。其检测原理如下：探针结合区野生型HBV基因序列：5´-…739ATA CGG744 A…-3′, 针对突变区域设计的探针，Wild-Probe: 5´-…ATA CGG-3′；Val-Probe: 5´- …ATG TIG-（针对741～742位点突变，743位点设计摆动配对）；Ile-Probe: 5´-…ATA TAG-3′、5´-…ATA TCG-3′、5´-…ATATCG-3′（针对743位点突变）。变性的扩增产物与上述3种类型探针杂交后，再加入含生物素-7-dATP、Taq酶和Mg2 等的微测序缓冲液55℃温育。如果Val或Ile探针与靶DNA完全匹配，探针3′末端延伸一个带标记的腺嘌呤。反之，不匹配时，探针Tm降低，3′末端游离而不延伸标记的腺嘌呤。利用链酶亲和素酶标系统检测探针上标记的生物素，可判断样品中是否存在点突变。
而近期我们所进行的点突变检测是基于PCR-ELISA和杂交链稳定性的基础上发展起来的，主要是利用野生型和突变型序列与探针结合后在Tm值上的差异进行检测。
近年来随着新技术、新材料的不断涌现，已知基因单位点突变检测技术将会得到迅速的发展，从而距离理想的突变扫描方法（即：对大片段DNA进行突变扫描，100%的检出率，无假阳性或假阴性现象，不需复杂的设备、花费低、不需使用有害试剂和同位素、高效率、耗时短。）越来越近。
参考资料
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经典的ASO突变检测技术是利用探针与不同扩增产物之间杂交稳定性的差异来检测点突变。而FRET结合探针熔解曲线分析法（以下简称FRET法）正是通过对杂交产物稳定性进行实时监测，并结合熔解曲线分析，提高了对点突变检测的分辨率[9]。
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