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热门关键字：　细胞培养　 pcr 　琼脂糖凝胶电泳　质粒DNA的提取　凝胶加样缓冲液　 PCR inventor

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PCR技术的应用与微生物系统进化研究的发展

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-03-07 　本站论坛

PCR-RAPD可通过任意选择一个或二个引物，对基因组DNA进行扩增。扩增产物可经1.5％～2％琼脂糖电泳或在扩增的同时掺入³²P，然后经6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影得到DNA指纹图谱。其他还有诸如PCR定量检测技术、PCR-RELP等等。另外，继PCR扩增技术之后，又有一种新的核酸扩增技术──NASBA技术问世了。它与PCR不同的是：PCR技术要求有3个不同的温度，而NASBA只需在一种温度下就可以完成反应；NASBA的核酸扩增效率甚至比PCR的扩增效率还要高，2小时内目的基因可以扩增109倍；更主要的是NASBA能直接扩增单链RNA上的特异序列，这对RNA的研究意义非常重大。相信这项新技术的出现和广泛应用将大大加快各领域中的各项研究。

总之，现代分子生物学技术的迅速发展，给系统进化研究带来了越来越多的便利和可靠性，随之也推动了微生物系统发育学的建立和发展。据报道，在不远的将来，以表型为主的分类体系将发生大的变化，从而能更精确地反映微生物间的系统发育关系。

早期的分子标准主要建立在诸如DNA碱基比例测定或核酸分子杂交等基础上。我们知道，每一种生物体均有其特有的、稳定的核酸成分和结构；不同生物间核酸成分和结构的差异程度代表着它们之间亲缘关系的远近。由此，从核酸分子水平来研究生物的进化关系就成为分类学的一个新途径，微生物分类学也不例外。最早在1956年由Lee等提出了DNA碱基比例的测定方法。DNA碱基比例主要是指“G Cmol％”比例，即鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)在整个DNA中的摩尔百分比。不同种的微生物，其4种碱基的含量及排列顺序不同，因此G Cmol％比例一般会随种的不同而有变化。一般来说，G Cmol％差异愈大，分类地位愈疏远。而G Cmol％比例相似，可能属于同种，也可能不是同种，因为碱基成分相似的DNA可能有很多种碱基顺序。例如，螺菌属(Spirillum)的G Cmol％比例是38％～65％，辐度过宽。后来根据其碱基成分和其他特征的不同已被划分成3属：螺菌属(Spirillum，38％)、海洋螺菌属(Oceanspirillum，42％～48％)和水生螺菌属(Aquaspirillum，50％～56％)。

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