PCR技术:样品处理与注意事项
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PCR技术:样品处理与注意事项

点击:   作者:   来源:  时间: 2007-03-07  本站论坛
中,使细胞浓度约为6×106/ml,移至1.5ml管中;

  ⑤5060℃保温1h

  ⑥95℃保温10min使蛋白酶变性;

  ⑦冷冻储存。

  如果RBC多于细胞的10%,则用PBS1次(步骤12)后,悬浮于1ml溶液3,并转移至1.5ml离心管中,如程序B-2离心1次,再悬浮于溶液2中按程序A-4继续进行。

  (2)全血:此法使胞膜溶解故胞浆DNA丢失,约可得20μg DNA/0.5ml血。

  ①0.5ml全血与0.5ml溶液3共置1.5ml管中;

  ②13000×g离心20s

  ③吸去上清,加1ml溶液3,旋涡混合使沉淀重新悬浮;

  ④重复第232次;

  ⑤13000×g离心2s,吸去上清,悬浮于0.5ml溶液2中;

  ⑥按程序A57步进行。

  (3)拭子

  ①用PBS预温的试子从宫颈、阴道或阴茎采样;

  ②拭子置入2ml PBS(含抗霉剂)于15ml离心管中,室温可保存24h,置4℃可保存更长时间。也可用旋涡混合器振荡使细胞加速游离;

  ③取去拭子,200013000×g离心5min,吸去上清;

  ④如含RBC则加1ml溶液3,转移至1.5ml E管中,按程序B-2开始进行;

  ⑤如不含RBC则加溶液2,按程序A-4进行。

  (4)头发

  ①拔下头发,剪下头发近端0.5cm段;

  ②置入0.4ml溶液2中(1.5ml管);

  ③按程序A57步进行,用50μl体系作PCR

 

5)血细胞RNA用焦碳酸二乙酯(DEP)抑制RNase,NP-40溶胞但不溶核。

  ①用聚蔗糖-泛影葡胺或其它方法分离单核细胞;

  ②置2ml离心管中,加PBS至细胞中,500×g离心

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