| 中,使细胞浓度约为6×106/ml,移至1.5ml管中;
⑤50~60℃保温1h;
⑥95℃保温10min使蛋白酶变性;
⑦冷冻储存。
如果RBC多于细胞的10%,则用PBS洗1次(步骤1,2)后,悬浮于1ml溶液3,并转移至1.5ml离心管中,如程序B-2离心1次,再悬浮于溶液2中按程序A-4继续进行。
(2)全血:此法使胞膜溶解故胞浆DNA丢失,约可得20μg DNA/0.5ml血。
①0.5ml全血与0.5ml溶液3共置1.5ml管中;
②13000×g离心20s;
③吸去上清,加1ml溶液3,旋涡混合使沉淀重新悬浮;
④重复第2,3步2次;
⑤13000×g离心2s,吸去上清,悬浮于0.5ml溶液2中;
⑥按程序A5~7步进行。
(3)拭子
①用PBS预温的试子从宫颈、阴道或阴茎采样;
②拭子置入2ml PBS(含抗霉剂)于15ml离心管中,室温可保存24h,置4℃可保存更长时间。也可用旋涡混合器振荡使细胞加速游离;
③取去拭子,2000~13000×g离心5min,吸去上清;
④如含RBC则加1ml溶液3,转移至1.5ml E管中,按程序B-2开始进行;
⑤如不含RBC则加溶液2,按程序A-4进行。
(4)头发
①拔下头发,剪下头发近端0.5cm段;
②置入0.4ml溶液2中(1.5ml管);
③按程序A5~7步进行,用50μl体系作PCR。
(5)血细胞RNA用焦碳酸二乙酯(DEP)抑制RNase,NP-40溶胞但不溶核。
①用聚蔗糖-泛影葡胺或其它方法分离单核细胞;
②置2ml离心管中,加PBS至细胞中,500×g离心
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