实验目的
为了获得大量的AKP基因，我们需要将目的基因通过PCR扩增基因剂量，方便下一步实验作基因重组。
我们需要注意PCR产物的准确性和产率。特别注意引物、复性温度、TaqE对准确性的影响和延伸时间（1000bp/min）、Mg2 浓度、循环数（小于等于30）对产率的影响。
同时，我们要掌握PCR基因扩增及扩增产物的回收的基本原理和实验技术方法。
实验原理及过程
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实验步骤
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实验原理
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1 PCR体系的准备和PCR扩增的开始
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2.5mmol/L dNTP Mixture 4.0uL
10xbuffer Mg2 Ex－TaqE ddH2O 40uL
primer 4uL
模板DNA 2uL
940C,2’ 940C 1’ 420C 1’ 720C 2’ 720C 10’ I-------30cycles----I
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聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，即PCR技术。
在合适条件下，这种循环不断重复，前一个循环的产物可作为后一循环的模板参与DNA的合成，最终使产物DNA的量按2n方式扩增。
理论上讲经过30次的循环反应，DNA扩增倍数为106-109。
PCR引物的设计至关重要，3’端要严格配对，5’可以引入酶切位点，也可以由此控制Tm值和CG的比值。
TaqE有最适温度和反应的活性，要注意它有加尾活性。
循环数超过30个以后，因为产物数量增加和反应物数量的减少，反应速度降低，这时对反映的产率已经没有贡献，反而副产物增多,影响效果。所以，循环数不应超过30。
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2 PCR产物电泳
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0.8 %Agarose（1×TAE） 80伏恒压电泳
全部PCR产物上样电泳：
6uL 10xloading
6uL SYBR
marker部分：
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