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新型的基因分型技术(SNP分型):巢式PCR-RFLP技术

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-03-06 　本站论坛

图a 　rs9309462CTCGGGCCGCGAGTCCAATTTATACAAAAA C/T GTTGTATTTTTAGCCCTGGGCTCTGTTTAGATGGCG CTCGGTGGAAACGG 　

图brs4646642　GGGGCAGATGTTTGGGCCGGGAACAATTTTC/T
CAAGGTTGTAAAGCCAAATTATCATTTCATGTTATCCATTTCTTCAAAGC

图c 本改造方案的成功之处在与3’端碱基的改造，一般而言，如果PCR引物的近3’端的几个碱基不能与模板互补，其实验是不能成功的，事实也大致如此。但本公司所采用的方案确能成功的将3’端引物进行改造，即使是3’端最后一个碱基与模板不匹配，我们也能成功的进行改造。如SNP（rs10491482），在改造过程中，与SNP直接相邻的GAA被改成了TGC，形成了GTGCAC(ApaLI)，就有3’端最后一个碱基被成功改造，形成限制性内切酶识别序列。rs10491482AGGCAGCCATGGACAATTTGCCTTTTTATTCTACTTGGAA A/G CTCTGCTGATAAAGCTGTTT AAGGGGCTCAGGTGCTGACAGGCTGGGCACTGTCAGTATC

图d　这里所展示的实例，往往改造2、3、4个碱基，事实上，本方案理论上可进行5个碱基的改造，从而人为构建一个识别位点，但从碱基的组合而言，需要改动如此多的碱基很少，而且PCR效率也不是很高，因此若非有特殊需要，一般不产生5个碱基的改动。

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