一、PCR操作范例
在一个典型的PCR反应体系中需加入：适宜的缓冲液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐热性多聚酶、Mg2 和两个合成的DNA引物。模板DNa 94℃变性1min，引物与模板40～60℃退火1min，72℃延伸2min。在首次循环前模板预变性3～5min；在末次循环后，样品仍需继续延伸3～5min以上，确保扩增的DNA为双链DNA。为便于了解PCR反应中各成份的组成，加入量和反应条件，使人们以此为基础，对不同的研究对象逐项改变来找到最佳反应条件，特列举Perkin Elmer Cetus公司Gene Amp DNA试剂盒提供的典型反应条件供参考。
表22-1 PCR反应混合液
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成分 |
加入体积（μl） |
最终浓度 |
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双蒸馏水 |
53.5 |
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10×反应缓冲液[1] |
10.0 |
[1×]Mg2 1.5mmol/l K 50mmol/L |
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4×dNTPs(各1.25mmol/L) |
16.0 |
各200μmol/L |
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λ-DNA模板（全长48.5kD） |
10.0 |
1ng/次 |
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引物1,2（各25bp,20μmol/L）[3,4] |
5.0 |
1.0μmol/L（100pmol） |
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Taq聚合酶储存液[2] |
0.5 |
2U/100μl |
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总体积（pH8.3） |
100.0 |
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