错配PCR-限制性片段长度多态性分析检测HBV前终止admin888变异株技术
网站地图本站论坛
高级搜索收藏本站
 
 当前位置:试验方案>核酸试验>PCR>PCR基础> 正文

错配PCR-限制性片段长度多态性分析检测HBV前终止admin888变异株技术

点击:   作者:   来源:  时间: 1970-01-01  本站论坛

对经 mpPCR- RFLP技术判断的两份前 C 区终止密码变异株标本和两份无变异的标本的mpPCR产物经双脱氧链末端终止法测序,其结果经电子计算机分析均为HBV&127;前C区特异性序列,并与RFLP分析结果相符。敏感性试验结果显示本法可检出105拷贝/ml的HBV DNA。对照试验与重复性试验结果显示本法试验结果稳定。

对74份慢性乙型肝炎患者血清进行mp PCR-RFLP分析,结果17例前C区终止密码变异(23%),其中抗-HBe阳性8例。在8例抗-HBe阳性的前C区终止密码变异株感染者中1例为慢性重型乙型肝炎,在发生抗-HBe血清学转换时病情呈急性加重,并持久发展,最终出现肝衰竭,但HBV DNA持续阳性;5例肝功能持续或反复异常,转氨酶轻、中度升高,其中2例变异发生在干扰素治疗后出现HBeAg抗-HBe转换之后;另有2例肝功能正常。

前C区第83位nt点突变使密码TGG变成终止密码TAG,不再产生HBeAg[3]&127;。&127;HBcAg与HBeAg有很长的共同序列,仍可引起宿主持久的抗-HBe应答[2],&127;HBeAg&127;是HBV感染时的免疫耐受因子,能阻断T细胞毒性,调节特异的T细胞耐受性[5],因而在HBeAg( )的慢性无症状携带者常有很高的感染水平却无相应的炎症应答。当前C区第83位nt点变异导致HBeAg消失时,可诱发急性炎症活动,&127;甚至导致暴发性肝衰竭[14]

前C区变异也是病毒在宿主免疫压力下或经干扰素治疗后发生的一种免疫逃避[15,16]。前C区终止密码变异使靶抗原HBeAg由感染的肝细胞表面消失,&127;而不能被T细胞所识别,HBV变异株感染得以长期持续[4]


对前C区终止密码变异株的治疗,目前尚缺乏有效手段,本组8例变异株感染者中有2例曾用过干扰素α(Intron A)治疗,但仅有部分反应,停药后均复发。

因此,有必要进一步开展对HBV前C区终止密码变异株的分子生物学、免疫学、致病机理与临床诊断及治疗研究,而本文所报道的改良mpPCR-RFLP&127;技术是检测HBV变异株的特异敏感而又简便的方法,值得临床推广应用。

 

参考文献

  1. Hadziyannis S. Immunopathognesis and &127;natural &127;course &127;of &127;anti Hbe( ) chronic hepatitis with replicating B virus.In:Hollinger &127;FB,&127;eds.&127;Viral hepatitis and liver disease. Baltimore: Williams and Wilkins,1991,673
  2. Carman&127;WF, Thomas&127;HC. Genetic Variation&127;in&127;hepatitis&127;B&127;virus.Gastroenterology,

    1992,102:711

  3. Carman WF, Jacyna MR, Hadziyannis S, et al. Mutation preventing &127;formation of hepatitis B e antigen in patients with chronic hepatitis B infection. Lancet, 1989,11:588
  4. Brunetto MR, Giarin M, Oliveri F, et al. Eantigen &127;defective &127;hepatitis &127;B virus and course of chronic infection. J Hepatal,1991,13:982
  5. Milich DR, James JE, Hughes &127;JI.&127;Is a function of the secreted HBe antigen to induce immunological tolerance in utero? PNAS,1990,87:6599
  6. 骆抗先,杨洁,李秀惠,等. 前C区A83点突变在乙型肝炎病毒感染中的分布.&127;中华医学杂志,1994,74:478
  7. Seibel P, Degoul F, Romero N, et al. Identification of point mutations by mispairing PCR as exemplified in merrf disease.&127;Biochem Biophys Res Commun,1990,173:561
  8. Lin FH, Lin R. A comparison of single nucleotide primer &127;extension &127;with mispairing PCR-RFLP in detecting a point mutation.Ibid,1992,189:1202
  9. 杨洁,梁炽森,骆抗先. 错配PCR限制片段长度多态性分析:检测HBV前C区A83点突变.第一军医大学学报,1994,146:95.
  10. 骆抗先,候金林,梁炽森. 乙型肝炎病毒基因变异研究中亟须商榷的几个问题.&127;中华内科杂志,1995,34:221
  11. Liang TJ, Hasegawa K, Rimon &127;N, et al.&127;A &127;hepatitis &127;B &127;virus &127;mutant associcated with an epidemic of fulmilant hepatitis. New Engl J Med,1991,324:1705
  12. Okamoto H, Yotsumoto S, Akahane Y, et al. Hepatitis B virus with &127;precore region defects &127;prevail &127;in &127;persistently &127;infected hosts along with seroconversion to the antibody aganist e antigen.J Virol,1990,64:1298
  13. Brunetto MR,Capra G,Randone A,et al.&127;Fluctuations&127;of&127;wildtype and&127;HBeAg(-)&127;HBVs in IFN&127;response &127;and &127;hepatitis &127;reactivation.&127;&127;1993 International Symposium on Viral Hepatitis and Liver Disease Abstr.&127;Vol.Tokyo:HFL,1993:73
  14. Omata M, Ehata T, Yokosuka O, et al. Mutations in the precore &127;region of Hepatitis B virus DNA in patients with fulminant and &127;severe &127;hepatitis. New Engl J Med,1991,324:1699

    上一篇:PCR反应体系   下一篇:聚合酶链反应[PCR]

    共4页: 上一页 [1] [2] 3 [4] 下一页

 
推荐文章
·PCR产物克隆
·引物设计软件oligo应用简介
·PCR引物设计的黄金法则
·PCR产物的克隆
·PCR的基本原理
·The Polymerase Chain Reaction (PCR)
·Real-Time PCR 与Traditional PCR比较
·PCR[polymerase chain reaction]技术总论
·Primer Design:Manual and Automated Prime
相关文章
推荐专题


↑返回顶部   打印本页   关闭窗口↓  
 本站申明 联系我们 网站地图
Copyright© 试验方案

Powered by DedeCms email:htmyth#yahoo.com.cn

Optimized to 1024x768 to Firefox,Opera and MS-IE6