PCR技术与病毒性肝炎检验及病程跟踪

肝炎病毒颗粒的存在与否决定了它的传染性的有无，而肝炎病毒特异性DNA或RNA是肝炎病毒是否存在的直接证据。另外，研究发现只要HBV DNA存在就可以引起乙肝的传染。因此，PCR法检测病毒基因，是判断传染性最直接、最可靠的证据。在乙肝感染过程中，有时对病人体内是否有乙肝病毒的复制，即病人有无传染性的判断并不容易，PCR法的出现使这些问题在很大程度上得到解决。我们以其中较为典型的情况，分别进行简要的讨论。首先是低复制病毒持续性感染病人，由于HBSAg表达很少，病人血清中抗原浓度较低，超出了EIA检测的极限无法用酶标免疫法检出。临床实践中要判断有无HBV存在，以前都采用酶免法、HBV DNA杂交法，而这些方法的敏感度较低，不易检出，容易漏检。病毒低复制持续性感染的发生机制可能与下面三种情况有关：（一）HBV基因整合到宿主DNA中，暂时不表达；（二）由于其它病毒复合感染抑了HBSAg表达；（三）由于机体的肝脏炎症反应清除了大部分病毒标志物。实验表明PCR法有极高的灵敏度，可以检测到1fg的HBV DNA，敏感度可达10CID/ml，因此PCR法的应用可以从HBSAg阴性病人血清中检出HBV DNA有关这方面的报道很多，骆抗先等在36例HBSAg阴性拟为慢性活动性肝炎病人中24例检出HBV DNA。Liang也报道应用PCR法检测HBSAg阴性肝炎病人，其HBV DNA检出率在30％左右，其次是对慢性肝癌及肝炎后肝硬化病人。流行病学的研究表明，原发性肝癌、肝炎之间有很大的相关性。分子生物学的研究也在肝癌细胞中发现HBV DNA同源性片段。特别是在中国，原发性肝癌一个最主要的致病因素就是乙肝病毒感染。但是以前对HBV感染标志物的检测，主要是应用EIA法，由于其敏感性的不足，相当比例原发性肝癌病人血清中检不出肝炎病毒感染的指标。而PCR法因其较高的敏感性，检验的结果表明，有大部分HBSAg阴性原发性肝癌患者体内可以检出HBV DNA，其检出率达60-80％，进一步证实了HBV DNA与原发性癌的发病有密切的关系。另外，PCR技术的应用还证实不仅在病人的血清中存在HBV DNA，在其白细胞、肝病变组织及乳汁、精液等体液中均有可能检出乙肝病毒DNA。这些乙肝病毒的普遍存在，在预防医学研究中有很重要意义。

对丙肝病毒感染检测标志目前主要是应用EIA法。EIA Kit多采用我工合成抗原，包括反应板检测病人血清中的对丙肝病毒的特异性抗体，这是因为丙肝病毒在血清中浓度很低无法用EIA法检出，只能检测相关的抗体。核酸杂交的方法因其敏感度的限制，也不能准确地判断机体的感染状况。唯RT-PCR方法，不仅能直接检测丙肝病毒基因（RNA）而且具有极高的敏感性，可以检出少至10CID/ml的丙肝病毒，是检测丙肝病毒的最有效方法，可以准确判断HCV的传染性。

三、PCR与肝炎病程跟踪与动态分析。

在PCR技术出现以前我们熟知的对乙肝动态分析方兴未艾，主要是依“二对半”的检测。一般认为HBSAg是“乙肝”的早期标志物，是急性“乙肝”的诊断依据。随着病性的进展出现的“E”抗原与核心抗体，提示病人处于感染的高峰期。然后，在机体的作用下“E”抗原消失，随之出现“E”抗体这时病人有两种转归，一种是“C”抗体消失，代之现抗HBSAg抗体，相继HBSAg及“E”抗体消失病人恢复；另一种则是抗“C”抗体或“E”抗原、抗体系统反复轮换持续存在并超过三个月以上，终演变成慢性肝炎。实际在临床实践中，这种典型病情变化的病例极少，大部分病人所表现的“二对半”组合与病情极其复杂，有的只出现