临床上难治性白血病11例，诊断时WT1N 表达均高于50，其中WT1N 表达最高值为527，该例患者诊断时外周血WBC 244.4×10
9/L，BM示：AML-M
2，免疫分型CD
13、CD
33、CD
34、CD
22高表达，染色体核型：47，XX， 11[6]，该患者经标准方案诱导3疗程未缓解放弃治疗。对其中第3例M
2患者随访7月，动态检测WT1表达5次，发现WT1再次升高(图2), 提示疾病复发。余15例患者诊断时WT1N 表达均低于50，均在两个疗程之内达完全缓解，且缓解后半年内未复发，对第97例M3患者随访了19个月，检测WT1表达9次(图3)，患者处于持续CR状态。
讨论
白血病患者获得CR后是否有微小残留病(MRD)的存在与预后密切相关，动态监测MRD可以早期预报复发，据此能及时采取有效的治疗措施以防止复发，因而MRD的监测是白血病治疗过程中的一个重要环节。国外许多学者采用RQ-RT-PCR短期或长期动态监测急性白血病患者WT1表达水平, 结果显示：在正常者及纯化CD34
细胞仅表达极微量WT1转录本，甚至在正常PB中检测不到；相反，在所有的急性白血病初诊治时，其BM和PB中WT1表达很高，随访WT1表达与其它用来监测MRD分子标志（融合基因产物）意义相同，且AL随访中，WT1再次增高往往预示着复发。AML亚型中发现AML-M5中WT1表达水平低，且WT1表达水平与性别、起始白细胞计数、核型预后因素无关。因此WT1检测可以很好地评价治疗效果，监测白血病MRD，尽早提示复发，监测急性白血病异基因移植后复发[3-4]。我们发现急性白血病患者骨髓细胞中WTl基因表达具有一定规律性（拷贝数/100 ng RNA）：初发及复发患者表达水平在10
4~10
6对数级，而取得完全缓解的患者及健康供髓者其表达水平仅为0~10
3对数级，二者间相差3个对数级，经GAPDH校正后发现前者明显高于后者，且WT1表达水平与急性白血病初诊时外周血白细胞计数及骨髓中原始细胞比例无相关性；比较不同白血病亚型之间WT1表达水平，发现急性粒细胞白血病中WT1表达明显高于急性单核细胞白血病，与文献报道相符，另外本文发现WT1表达水平与染色体核型预后因素呈正相关，但与mdr1表达水平无相关性。染色体核型预后差的WT1表达高于预后良好型，尤其是涉及11号染色体异常的4例患者其WT1表达水平非常高，且临床治疗困难，预后较差，提示了WT1表达水平可用于评估白血病预后。究其是否与WT1定位于11号染色体短臂有关，尚需进一步研究。对于26例患者进行临床随访，发现诊断时WT1N 表达>50的，临床上均为难治性白血病，预后差，2例WT1动态监测结果提示WT1的表达水平可以提示复发，监测MRD。由于仅对26例患者进行mdr1表达水平检测，WT1与mdr1表达相关性研究尚需较大样本研究来进一步证实。
在正常者及其他血液病如淋巴瘤、增生性贫血、ITP、过敏性紫癜患者BM中，WTl基因处于较低的表达水平或检测不到。在白血病初发患者，其WTl基因平均表达水平显著高于对照组，表明该基因在白血病细胞中的表达具有较高的特异性，可作为急性白血病细胞的标志基因，用于临床鉴别诊断或疾病筛查，特别是对于缺乏系别亚型特异性分子标记的AML患者。
实时定量RT—PCR是最近发展起来的一项新技术，它结合探针杂交的高度特异性，PCR技术的高效核酸扩增和光化学技术的敏感及易定量等优点，从扩增到结果分析均在PCR反应管封闭状态下进行，解决了PCR产物污染而导致假阳性的问题，同时也提高了灵敏度，其结果用拷贝数来表示，这种绝对数量更为准确，易于统一标准，便于不同的实验室之间进行比较[5]，本实验采用荧光定量RT-PCR方法对WTl基因的表达进行了研究，表明该技术具有较好的灵敏性和可靠性，可作为WTl基因检测的首选方法。
参考文献
1．Menssen HD, Siehl JM, Thiel E. Wilms tumor gene (WT1) expression as a panleukemic marker. Int J Hematol, 2002;76:103-109.
2．Liu Yin JA .Minimal residual disease in acute myeloid leukemia. Best Pract Res Clin Haematol, 2002;15: 119-135.
3．Trka J, Kalinova M, Hrusak O, et al. Real-time quantitative PCR detection of WT1 gene expression in children with AML: prognostic significance, correlation with diseasestatus and residual disease detection by flow cytometry. Leukemia, 2002; 16: 1381-1389.
4．Ogawa H, Tamaki H, Ikegame K, et al. The usefulness of monitoring WT1 gene transcripts for the prediction and management of relapse following allogeneic stem cell transplantation in acute type leukemia. Blood, 2003; 101: 1698-1704.
5．Ginzinger DG. Gene quantification using real-time quantitative PCR: an emerging technology hits the mainstream. Exp Hematol ,2002;30:503-12.
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