RT-PCR常见问题分析及其解决方案

使用扩增级DNaseⅠ处理RNA；设置没有逆转录的对照反应检测DNA污染。

设计在3'端没有互补序列的引物。

对于每一个模板和引物组合优化镁离子浓度。

使用抗气雾剂的吸头和UDG酶

产生弥散（smear）条带

第一链产物的含量过高

常规PCR反应步骤中减少第一链产物的量

PCR反应中引物过多

减少引物的用量

循环数过多

优化PCR反应条件，减少PCR的循环次数

退火温度过低

提高退火温度，防止非特异性的起始及延伸

Dnase降解DNA是产生的寡核苷酸片段产生的非特异性扩增

提取高质量RNA，防止被DNA污染