感受态细胞转化效率的检验
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感受态细胞转化效率的检验

点击:   作者:   来源:基因酷  时间: 2007-10-21  本站论坛
为确定感受态细胞的转化效率,可将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中,取一部分转化的细菌,涂布到选择培养基上,可用菌落生长单位/μg DNA,按下面的方法计算感受态细胞的转化效率.计算公式:转化效率=产生菌落的总数/铺板DNA的总量。
例如,取1μl(0.1 ng/μl)完整的质粒转化100μl的感受态细胞. 向转化反应液中加入900μl培养液,让细菌恢复一小段时间,取100μl铺板.培养过夜,产生1000个菌落。转化0.1 ng DNA,用SOC稀释到1000μl后,取1/10涂平板,则涂平板共用0.01 ng DNA 质粒,所以转化率=1000克隆/0.01 ng DNA =105 cfu/ng=108 cfu/μg.
转化效率1×106 cfu/μg DNA可满足普通的亚克隆实验;1×107 cfu/μg DNA用于作更复杂的亚克隆,有限量的DNA的转化,T-克隆实验;构建文库和突变要求用的转化的效率为>1×108 cfu/μg DNA。

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