感受态细胞常用的制备方法
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  • 感受态细胞常用的制备方法

  • 点击:    作者:   来源:基因酷 日期:2007-10-21    本站论坛

方法五:TSB法
实验试剂:
1M Mg2+ (1M MgSO4 和 1M MgCl2等体积混合),用0.22um滤膜超滤除菌。
TSB液(30mL/ 80mL菌液)(现配现用): PEG3350 3g ;Tryptone 0.3g ;Yeast extract 0.15g ;NaCl 0.3g ;以上 121℃, 15min 灭菌后,加入1M Mg2+600uL , 以及DMSO 3mL
实验步骤:
1、 活化菌株 。
2、 挑单菌落培养于5mL 的液笨培养基中。
3、 取液体培养物50uL于80mL的液体培养基中进行扩大培养 。
4、 370C培养3-4小时,OD600在0.4-0.6 。
5、 离心,去上清 。
6、 加入20mLTSB,重悬 。
7、 离心,去上清 。
8、 加入10mLTSB,再加入15-20%的甘油,分装保存。
注:整个操作过程均应在冰上进行。所用药品均需灭菌。


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