方法四：
1、 将1ml过夜培养的细菌（如DH52、TG1、TM101）接种于100ml2×YT培养于500ml烧瓶。于37℃刷烈振荡，通常≥200rpm培养的细菌密度约OD550=0.2～0.5(5×107cells/ml),需2～4h。
2、 将培养物放于冰上致冷10min，于4℃离心细菌培养物，10000rpm离心10min。
3、 弃除上清，将细菌悬浮于原始培养体积的一半（约50ml）的50mMCaCl2和10mm Tris?HCl（pH8.0）无菌冷冻液体中。
4、 将细菌悬浮放在冰上约5min，然后将悬浮物于4℃10000/rpm离心10min。
5、 弃上清，悬浮细菌于原始培养体积的1/15的50mMCaCl和10mMTris?HCl（pH8.0）无菌冷冻中。此时的细胞是感受态细胞，即可用于转化。200μl分装于无菌的1.5ml微量离心管中，贮存于-80℃冰箱中。
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