化学物质、病毒和癌基因等方法转化细胞的技术
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化学物质、病毒和癌基因等方法转化细胞的技术

点击:   作者:   来源:  时间: 2007-03-14  本站论坛
1)致癌化学物转化细胞:转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验
1.取材:妊娠后第13天取材,取数个同窝胚胎,去头和内脏,在无菌条件下剪碎至米粒大小,再用0.25%胰蛋白酶(含0.01EDTA37℃消化30分钟,滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入75cm/培养瓶中,接种密度1020×106/75cm37℃培养23天,在顺利情况下能迅速长满瓶面。
2.贮存:选大批生长状态良好的细胞冻存,储以备用。
3.致癌物处理:取冻存细胞,解冻,接种于25ml培养瓶中,每瓶含细胞10万~30万。待细胞生长进入指数增生期时,向培养瓶中加入致癌剂MNNG。致癌剂量13微克/毫升营养液。在37℃温箱中培养1248小时。
4.低血清培养:弃掉MNNG作用液,用温PBS13次,加入含20%小牛血清,继续置温箱中培养23周,然后改用含5%血清培养液培养。低血清培养液不利于正常细胞生长,但已转化的细胞仍能增殖和形成转化灶。
 
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