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基因治疗（Gene therapy）

点击： 作者： 来源： 时间： 2007-03-06 　本站论坛

2）乙型血友病的治疗：
我国复旦大学等单位对乙型血友病的基因治疗也进行了有意义的探索，他们在兔模型的基础上，将人第Ⅸ因子基因通过重组质粒（pcmvix）或重组反转录病毒（N2CMVIX）导入自体皮肤成纤维细胞，获得可喜的阶段性成果，相信不久的将来，基因治疗会在我国取得成功。
3）其它遗传病的基因治疗：
对于杜氏营养不良症（DMD）的基因治疗，由于有小鼠动物模型，也取得一定进展。例如1993年法国将Ad-RSVmDys（腺病毒－罗斯病毒小肌营养不良蛋白基因重组体）注入小鼠肌内成功。即用腺病毒为载体，与小肌营养不良蛋白（minidystrophin）基因的cDNA重组，在RSV启动子启动下，作肌肉注射，证明可在肌营养不良（mdy）小鼠肌肉表达，其它遗传病诸如白种人中常见的囊性纤维化的进展也很快。此外，对一些遗传病地中海贫血、高雪氏病等正在探索中。
2、恶性肿瘤：
采用反义技术抑制和封闭癌基因，也可增补抑癌基因的作用。常用基因修饰的TIL（tumor infiltrating lymphocyte）回体法、基因修饰的肿瘤细胞、自杀基因的应用。
黑色素瘤的基因治疗：
对肿瘤进行基因治疗是人们早已期望的事，在进行了多方面探索的基础上，发现了肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte-TIL，即能在肿瘤部位持续存在而无副作用的一种淋巴细胞）在肿瘤治疗中的作用。
1992年实施了TNF／肿瘤细胞和IL－2／肿瘤细胞方案，即分别将IL－2基因、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor， TNF）基因导入取自患者自身并经培养的肿瘤细胞，再将这些培养后的肿瘤细胞注射至病人臀部，3周后切除注射部位与其引流的淋巴结，在适合条件下培养T细胞，将扩增的T细胞与IL－2合并用于病人，结果5名黑色素瘤病人中1名肿瘤完全消退，2名90％的肿瘤消退，另2人在治疗后9个月死亡。由于携有TNF基因的TIL可积于肿瘤处，因而TIL的应用提高了对肿瘤的杀伤作用。
3、病毒性疾病：
肝炎、AIDS等，应用基因转导分泌抗病毒因子或用反义技术封闭病毒基因的表达。

四、基因治疗的前景
1、反义技术（antisense oligodeoxynucleotides）：
又称反义寡核苷酸技术，是指利用人工合成的反义RNA和反义DNA来阻断基因的转录或复制，控制细胞生长在中间阶段，使编码蛋白质的基因能转录为mRNA，因而不能翻译成相应的蛋白质，以达治疗某一疾病的目的。
用反义DNA已对某些癌症进行临床试验。这类反义技术只能认为是一种从基因水平进行治疗的技术，它们以不同方式，在DNA复制、转录和翻译水平发挥作用。由于它们的分子量低，故而有潜力进入靶细胞，但其临床稳定性、毒性、细胞通透性等各方面都需要进一步研究。

2、药物靶向治疗（drugs targeting）：
此法机理可概括为病毒导向酶的药物前体治疗（virus directed enzyme pro-drug therapy， VDEPT），即用反转录病毒载体的外源基因转移到细胞内。该基因编码一种酶，此酶可将一种无害的药物前体转变为细胞毒素复合物。带有这一基因的病毒载体只在特殊组织或肿瘤细胞中而不在正常细胞中表达。
例如，胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase）可将无害的5－氟胞嘧啶（5-fluorocytosine，5-FC）转变为细胞毒素5－氟胞嘧啶（5-fluorocytosine，5-FC）。此病毒可感染正常细胞和癌细胞，但将该酶基因连接到一种“分子开关”后，则只能在肿瘤细胞中表达。

五、基因治疗存在的问题：
1．早期诊断难，
2．重组的目的基因整合于染色体上的随机性，
3．外源基因表达水平难以控制，
4．多基因遗传易感性疾病难度大。
六、基因枪技术在现代生物领域中的应用
1．基因枪技术是一种全新的基因导入技术，其工作原理是将DNA包被在钨粉或金粉颗粒表面，在高压冲击下，将加速的粒子穿透细胞壁。DNA随着粒子进`入细胞内，实现遗传的目的。
2．发展史：
第一代，火药基因枪：于1987年由美国康奈尔大学Sandford等设计制造：当火药爆炸时，载有微粒子弹的微粒子弹载体被驱动向下高速运动，至阻挡板时，微粒子弹载体被阻挡，而其端部的微粒子弹继续以高速度向下运动，击中样品室中的靶细胞。但该方法安全性较差。
第二代，高压放电基因枪：高压放电基因枪是通过高压放电引起水滴汽化所产生的冲力，驱动着微粒子弹与微粒子弹载体向上加速，其中，微粒子弹载体被阻挡网阻挡，而微粒子弹则穿过阻挡网继续向上加速，轰击真空室中的靶组织或组织。但该方法高压放电时产生的热气体对转基因工作不利，目前已基本不采用。
压缩气体驱动的基因枪：台式基因枪是利用不同厚度的聚酰亚胺薄膜制成可裂圆片，来调控氦气压力，当氦气压力达到可裂圆片的临界压力时，可裂圆片爆裂并释放出一阵强劲的冲击波，使微粒子弹载体携带微粒子弹向下高速运动，轰击靶细胞或组织。手提基因枪是直接发射DNA的仪器。手提枪产生冲击波携带DAN微弹射向受体，用压缩气体氦气作为动力源。
3．应用：军事医学科学院放射医学研究所利用基因枪技术转移肝细胞生长因子基因治疗大鼠肢体闭塞血管病。用基因枪成功地将能促进内皮细胞生长、促进血管新生和侧支循环形成的人肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）的基因导入大鼠肢体缺血局部，为闭塞外周血管病的治疗探索了一个新的途径。详见2001年第4期《生物技术通讯》。
4．基因枪技术作为新兴的转移基因的优点：
(1)简单，以快速、方便地转移基因。一次转基因过程可在5s内完成。
(2)对靶细胞几乎没有要求。由于基因枪技术是一种纯物理的基因转移技术，不要求靶细胞的表面有任何特殊的化学结构，也不要求靶细胞处于特定细胞周期状态。
(3)基因用量少，
(4)对转移基因的大小要求不严格，从数kB的质粒DNA，到23kB以上的染色体基因组DNA都能够包裹在直径为1～2mm的金属颗粒表面
(5)能够获得高水平的共转移。
(6)安全性很高。纯金无化学及生物学活性，不会对机体产生毒性，而且转基因量很少可定点局部表达。
(7)可以获得持续时间较长的瞬时表达。
(8)转移靶面积较大，基因枪转移范围约2cm2。
(9)用于临床时病人无痛苦。鉴于以上优点，基因枪在哺乳动物基因治疗研究中的应用越来越广泛。

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