|
DNA的重组 DNA Recombination
一、同源重组
发生在同源序列间的重组称为同源重组(homologous recombination)，又称基本重组。
是最基本的DNA重组方式，通过链的断裂和再连接，
在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。
二、细菌的基因转移与重组
（一）接合作用(conjugation)：
当细胞或细菌通过菌毛相互接触时，
质粒DNA从一个细胞(细菌)转移至另一细胞（细菌）,
这种类型的DNA转移称为接合作用。
质粒：细菌染色体外的环状双链DNA分子。
可接合质粒，如 F 因子(F factor)
（二）转化作用(transformation)：通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型。
（三）转导作用(transduction)：当病毒从被感染的（供体）细胞释放出来、再次感染另一（受体）细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用。
重组DNA技术
一、重组DNA技术相关概念
（一）DNA克隆（也称基因克隆或重组DNA）
应用酶学的方法, 在体外将各种来源的遗传物质DNA与载体DNA接合成具有自我复制能力的DNA分子，再通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，经扩增提取获得大量同一DNA分子。
生物技术工程: 基因工程、蛋白质工程、 酶工程、细胞工程等
基因工程----实现基因克隆所采用的方法 及相关的工作称基因工程, 又称重组DNA工艺学。
目的 ：1、分离获得某一感兴趣的基因或DNA序列 2、获得感兴趣基因的表达产物(蛋白质)
（二） 工具酶
•限制性核酸内切酶
• DNA聚合酶I
• 逆转录酶
• T4DNA 连接酶
• 碱性磷酸酶
• 末端转移酶
• Taq DNA聚合酶
限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。
Ⅱ类酶识别序列特点—
（三）目的基因（又称外源DNA）
•cDNA：经反转录合成的、与RNA（mRNA或病毒RNA）互补的单链DNA。
•基因组DNA：在真核生物体，基因组是指一套完整单倍体DNA（染色体DNA）和线粒体DNA的全部序列。
（四）基因载体（克隆载体）：为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。
常用载体：质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA
克隆载体(cloning vector)：为使插入的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体。
表达载体(expression vector)：为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计的载体
二、重组DNA技术基本原理及步骤
1、目的基因的获取
2、基因载体的选择与构建
3、目的基因与载体的拼接
4、重组DNA分子导入受体细胞
5、筛选并无性繁殖含重组分子的受体分子（转化子）
（一）目的基因的获取
1、化学合成法
要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列。
2、基因组DNA文库(genomic DNA library)
基因组DNA文库：存在于转化细胞内由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合。
3、cDNA文库：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库（cDNA library）。
上一篇：荧光标记的染色体原位杂交及其在人类基因组研究中的应用 下一篇：基因治疗（Gene therapy） 共2页: 上一页 1 [2] 下一页 | 
