[原理]
DNA以核蛋白形式存在于细胞核中，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。蛋白酶K及链霉蛋白酶E的应用使这两个原则得到了保证。
蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA分子分离，EDTA抑制细胞中DNase活性，蛋白酶K或链霉蛋白酶E将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。再用酚、酚／氯仿抽提除去蛋白质，接着用氯仿抽提以除去DNA溶液中微量酚的污染。最后用无水乙醇沉淀DNA。为获得高纯度DNA，操作过程中常加入RNase除去RNA。获得高分子量DNA的关键是防止DNase降解DNA。故标本必须新鲜，在提取前细胞就保持完整，核、溶酶体等细胞器应没有明显破坏，提取DNA用的离心管等器皿及试剂应消毒。操作在4℃以下进行。
[操作]
1．组织DNA的提取
1)取小鼠新鲜肝组织，去除结缔组织，用剪刀剪成细小碎块
2)加10倍体积TE缓冲液，用玻璃匀浆器在冰浴中中速匀浆
3)将匀浆液转入10ml离心管以4000rpm离心10分钟，弃上清
4)加10倍体积TE洗一遍，以4000rpm离心10分钟，弃上清
5)加适量TE稀释
6)取400µl稀释液于1.5ml的Eppendorf管，缓慢加入10％SDS溶液，至终浓度0.5％ (加20µ1)，摇匀直至溶液变粘稠
7)加入Rnase(200µg／m1)至终浓度20ug／m1(42µl)混匀，置37℃保温60分钟总体积 (420µ1)。
8)加蛋白酶K(20mg／m1)至终浓度100ug／m1混匀(加21u1)，于50℃保温3小时，并间歇搅动(总体积441µ1)。
9)将此溶液冷却至室温，加等体积饱和酚抽提，以10000rpm离心10分钟。
10)取上清加1／2体积饱和酚，1／2体积氯仿／异戊醇抽提一次，以10000rpm离心10分钟
11)取上清，加等体积氯仿／异戊醇抽提一次，以10000rpm离心10分钟
12)加1／10体积5MKAc，加2倍体积无水乙醇充分混匀，以12000rpm离心10分钟
13)加lml70％乙醇洗沉淀，以12000rpm离心10分钟
14)待酒精挥发尽后加20ul TE溶解，4℃储存
2．电泳鉴定
取DNA样品2µ1加上样缓冲液10µ1 (含溴酚蓝指示剂和甘油)，在0.8％琼脂糖凝胶进行水平微型电泳，电压<5V／cm，时间2小时左右。电泳后取出凝胶，用0.5µg／ml的溴化乙锭染色20分钟，用紫外灯观察分析。
[试剂及器材]
1．试剂
蛋白酶K：称取20mg蛋白酶K溶于lml消毒双蒸水中，－20℃备用。
RNase(牛胰)：称取10mgRNase溶于lml下列混合液中：10mmol／l Tris-HCl，pH8.0； lmmol／L EDTANa2pH8.0；50％甘油。
10％SDS溶液：称取10gSDS溶于100ml消毒双蒸水中，于65℃保温2小时，贮存室温备用。
1×TE缓冲液(pH8.0)：10mmol／L Tris-HClpH8.0；lmmol／LEDTANa2pH8.0。配制后高压灭菌，4℃贮存。
1×TE饱和重蒸酚(pH8.0)
氯仿／异戊醇(24:1V／V)
10mol／LNH4AC，配制后高压灭菌，4℃贮存
无水乙醇(AR)
70％乙醇
2．器材
玻璃匀浆器；离心机；电泳仪；电泳槽；紫外透射反射分析仪。
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