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适合从动物细胞、动物组织或酵母菌中同步纯化总RNA 和基因组DNA纯化的总RNA ，
适合用于Northern Blot、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、
S1 核酸酶作图、RNase 保护测定、
制备mRNA 和构建cDNA 文库等各种RNA 分子生物学实验。
纯化的基因组DNA 适用于PCR、Southern Blot、RAPD、AFLP、RFLP 等分子生物学实验。
一、 试剂盒组成、贮存、稳定性
以每次从1×107 动物细胞、100 mg 动物组织或5×107 酵母菌中提取总RNA 和基因组DNA 为一次制备。
本试剂盒所有试剂在室温贮存2 年不影响使用效果。
Buffer R-A：细胞裂解液，室温密闭贮存。
Buffer R-B：蛋白质变性剂，室温密闭贮。
Buffer R-C：分相溶液，室温密闭贮存。
Buffer R-D：分相溶液，室温密闭贮存。
Buffer R-E：RNA 释放溶液，使用前检查溶液是否有沉淀析出，如有沉淀请于37℃温育溶解后再使用。
室温密闭贮存。
RNase-free Water：RNA 溶解溶液，室温密闭贮存。
Buffer TE：10 mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH8.5，RNase-free。RNA 溶解溶液，室温密闭贮存。
Buffer G-A：裂解液，溶解蛋白质-基因组DNA 复合物，释放基因组DNA。室温密闭贮存。
Buffer G-B：蛋白质变性剂，室温密闭贮存。
Buffer P2：分相溶液，室温密闭贮存。
Buffer B：DNA 结合溶液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2：脱盐液，使用前按试剂瓶上指定体积加入无水乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl, pH8.5。DNA 洗脱溶液，室温密闭贮存。
二、 简介
总RNA 和基因组DNA 同步纯化试剂盒是为从生物样品中同步纯化总RNA 和基因组DNA 设计的，可从≤1×107 动物细胞、100 mg 动物组织或5×107 酵母菌中提取多至150 μg RNA 和20 μg DNA。
本试剂盒采用全新的相分离技术分离、纯化RNA 和DNA，结合silica 膜选择性吸附DNA 的原理，达到快速、同步纯化RNA 和基因组DNA 的目的。本试剂盒纯化的总RNA 分子完整、纯度高，适合用于NorthernBlot、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、S1 核酸酶作图、RNase 保护测定、制备mRNA 和构建cDNA 文库等各种RNA 分子生物学实验。纯化的基因组DNA 长度介于30～150 kb 之间，适用于PCR、Southern Blot、RAPD、AFLP、RFLP 等分子生物学实验。
三、 原理
1. 细胞裂解、释放总RNA
含高浓度胍盐的Buffer R-A 迅速裂解细胞和细胞核，匀浆过程中基因组DNA 被剪切成相对较小的片
段，降低溶液的粘稠性，促使释放RNA。Buffer R-B 有效地变性蛋白质，使之与基因组DNA 形成紧密的
不溶性复合物，而保持RNA 分子的游离性，确保最大程度地释放RNA。
2. 相分离技术分离、纯化RNA 和DNA
不同于酚/氯仿抽提，本公司独创的相分离技术所形成的两相溶液体系中，上相为亲脂性有机相，下相为特定的饱和无机盐溶液形成的疏水环境。各种生物分子因其不同的理化特性而被分离开来：脂溶性成分（包括脂质、脂多糖、多糖、细胞代谢产物和色素）被分配到上相；长链状的基因组DNA 和蛋白质形成复合物沉淀在相间，被剪切成小片断的基因组DNA(<150 bp)则被分配在下相中；根据不同分离目的采用不同的相分配体系，可使RNA 分配在下相中或选择性地沉淀在离心管底。本试剂盒采用了这几种不同的相分离体系来分离、纯化RNA 和DNA。
（1）在Buffer R-C 驱动下，RNA 被分配在下相中，基因组DNA 和蛋白质形成复合物沉淀在相间。分离下相和相间沉淀分别作RNA 和基因组DNA 纯化。
（2）在分离到的下相中加Buffer R-D 进行相分离，将RNA 选择性地沉淀到管底，经50%乙醇洗涤后即可用于RT-PCR、Northern Blot、制备mRNA 和构建cDNA 文库等实验。
（3）在分离到的相间沉淀中加Buffer G-A 释放DNA，加Buffer G-B 变性蛋白质，再加Buffer P2 进行相分离，将DNA 分配到下相。
3. Silica 膜选择性结合DNA
在DNA-prep Tube 中整合有silica 膜，对DNA 有高盐结合低盐洗脱的特性。含DNA 的下相在加入结合溶液（Buffer B）调整溶液的离子条件和pH 条件后，DNA 可被选择性结合到silica 膜上，经洗涤进一步去除杂质后，DNA 可被微量去离子水或Eluent 洗脱下来。
4. 保持RNA 分子完整性
RNA 分子对RNA 酶和理化因素非常敏感。Buffer R-A 在裂解细胞和细胞核的同时迅速灭活RNA 酶，其他溶液均能强烈抑制RNA 酶活性，从而避免了RNA 酶的降解作用；相分离过程均在低温、近中性溶液中进行，减少了理化因素对RNA 分子造成的损伤，从而保证了RNA 分子的完整性。
四、 操作过程
在总RNA 和基因组DNA 同步纯化过程中要注意防止RNA 的降解。迅速抑制或灭活内源性RNA 酶，避免外源性RNA 酶污染，抑制理化因素对RNA 的降解，是提取完整RNA 分子的重要前提。
1. 样品收集
样品在分离后短时间内，细胞内的RNA 酶即被释放、激活，或者RNA 去保护暴露酶作用位点，导致大部分RNA 降解。建议收集新鲜的样品立即作总RNA 和基因组DNA 提取，或用液氮冷冻，置-80℃保存，
以防止RNA 在提取前降解。
（1）培养的动物细胞
从对数生长期细胞中提取的RNA 和基因组DNA 质量好、得率高，故用于提取总RNA 和基因组DNA 的细胞密度不宜超过85%，最好在提取前一天更换培养基。但有的基因是在特定的生长状态或激活状态下达到最适表达，故提取RNA 和基因组DNA 所需的细胞状态还需根据具体实验目的而定。
细胞在收集后应立即作RNA 和基因组DNA 提取或将收集管浸入液氮中冷冻完全后置-80℃保存。
（2）动物组织
动物组织分离后，立即置冰上剪切成0.5 cm 大小的组织块，浸入液氮中。冷冻完全后，立即作RNA 和基因组DNA 提取或置-80℃保存。脾脏、胸腺和淋巴结等富含RNA 酶的组织宜先用温和的方法分离成单细胞悬液再作总RNA 和基因组DNA 提取。
（3）酵母菌
收集对数生长期酵母菌，立即作RNA 和基因组DNA 提取。
2. 估算样品大小
可通过以下方法估算样品大小：
（1）培养的动物细胞：可根据表1 估算培养器中的细胞数量。
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