白细胞层用ACK 溶解（0．15mol／dm３ 氯化铵、0．01mol／dm３ 碳酸氢钾、0．lmol／dm３ Na２ EDTA），直到变成澄清的红色（约 5 分钟）。在 500r／min 离心 5 分钟后，小心吸去 ACK 和红细胞碎片，剩下的白细胞会重新悬浮于 ACK 中。2 分钟后，细胞成团沉淀，此时再用 PBS 洗。如果沉淀物仍为红色，则将整个过程重复一次，而后将其冻存。白细胞（酶的最好来源）也可以通过将等分血样铺展于20％的Ficoll、4．5％Na２ EDTA中的方法，使其沉降（10～15 分钟），再用巴氏吸管从界面吸取白细胞，于1000r／min 离心10 分钟，而后冻存。用 Ficoll 分离的红细胞很难再复原。
有些蛋白质可以用其他方式保存的血样进行分析：①保存于5℃并在几小时内送到实验室的；②冻存的全血（未处理过）；③全血或经分离的血样稀释于3 倍体积的苯甲醛中，并保存于室温下。蛋白质电泳是用于研究种群内遗传多样性或分类学差异的方法。同其他脊椎动物相比，哺乳动物血样并非是很好的酶和蛋白质的来源，有时取软组织更好。
7．l．2．6 用于核DNA 研究的软组织的保存
将组织切成1cm 见方的小块，包起来冻存。或将其放入几倍体积的80％乙醇（分析
纯）中，于4℃下存放。两种方法中以前一种方法更好。
7．l．2．7 用于核DNA 研究的血样的保存保存血样可用占血样体积0．01 倍的15％ K２EDTA 作为抗凝剂，并且最好能够加入0．05倍的蛋白酶K（0．1％，核酸级，Boehringer Mannheim 冰冻保存，用新解冻的），充分混合后迅速冻存。血与EDTA 混合液可在室温下放置几天，但DNA 的质量不会太好。
DNA 技术可以分析几乎所有组织样品基因组的任何一部分，从而能够克服用蛋白质研 究变异及分类学时出现的有关问题。
7．1．2．8 用于制备DNA 的毛发及精子样品的保存
虽然以前从干燥或用福尔马林固定的毛发及精子样品中提取过DNA，但最可靠的保存方法是冻存（Impraim 等 1987；Thomas 等 1990）。必须注意的一点是，尽可能地减少其他来源的DNA 对样品的污染，特别是实验者的手，因为PCR 反应对微量DNA 是很敏感的。较好的做法是仪器经烘烤（180℃过夜）或火焰消毒，其他所用的每一件东西（手套、试管、工作台面）最好用一套新的、经γ射线消毒处理的商业化产品。精子样品也可以用来作常规的遗传分析，如不需要人工控制交配就可进行连锁研究（Li 等1988）。当然，精子样品还可用于人工授精，这在圈养动物的遗传管理上是很重要的。
7．1．2．9 用于提取线粒体DNA 的软组织及血样的保存
最好将样品在4℃下保存，并尽快送到实验室。血样贮存于有葡萄糖柠檬酸包被的真空管中时，可以冻存几年（最好在液氮中），但解冻后只能在室温下保存几天时间。线粒体DNA 的分析对研究物种在地理分布上的变异及构建谱系尤其有用。
7．1．2．10 用于提供RNA 的软组织的保存
RNA 会在极短的时间内被破坏，因此必须在动物死亡或活检后1～2 分钟内迅速将其切成1cm 的小块，并放人液氮中冻存。
RNA 可用于 DNA 文库的构建，它能为遗传学家提供探针，用于个体总DNA 中单个活性基因的分析。虽然来源于其他动物的探针也能用，但用同种的探针效果最好。
7．2 动物组织DNA 样品的提取
目前提取高分子量的DNA 的方法已有很多，我们在这一部分中除了介绍常规的DNA提取方法外，还将着重讨论由微量样品（如毛发）和陈旧古老样品提取DNA 的一些新方法。
7．2．l 提取动物总DNA 的常规方法
从动物组织中提取DNA 的常规步骤如下：
（1）取动物组织100mg 左右于样品管中，用干净的剪刀将组织块剪碎。
（2）在样品管中加入如下试剂：
500μl STE 溶液
25 μl 蛋白酶 K（Proteinase K，10 mg／ml）
75μl 10％ SDS
（3）混匀后置56℃下消化2 小时以上（隔一定时间混匀一次）。
（4）加人等体积的饱和酚溶液，轻轻颠倒混合5 分钟以上（用于rDNA 和RAPD 分析的样品需抽提24 小时）。
（5）7 000r／min 离心5 分钟。
（6）小心将上层清液移至另一干净的离心管中，加入等体积的苯酚及氯仿，并重复步骤（4）和（5）的抽提过程。
（7）以等体积的氯仿（内含1／25 体积的异戊醇）重复步骤（4）和（5）的抽提过程。
（8）在上清液中加入 1／10 体积的 3mol／dm３NaAc 或 5mol／dm３NH４Ac、2 倍体积的冷无水乙醇或1 倍体积的异丙醇，以沉淀DNA。
（9）置—70℃下沉淀2 小时或置—20℃下沉淀过夜。
（10）7 000r／min 离心10 分钟，再以 70％冷乙醇洗涤DNA 沉淀一次。将沉淀置真空干燥器或37℃温箱中干燥。
（11）以适量的TE 溶液（200～500μl）溶解DNA 样品。
（12）以分光光度计测定DNA 的浓度（260nm），260／280nm 的光密度比值应在 1．8 以上，否则提示可能有蛋白质或苯酚的污染。
（13）以TE 溶液将DNA 样品稀释成所需的工作液的浓度。
（14）取2μl 左右的样品进行电泳检测，以判断 DNA 是否有降解以及是否需要消除RNA。
7．2．2 微量动物组织样品的总DNA 提取方法
从微量组织中提取DNA 的方法是1989 年由Singer-Sam（Walsh 等1991）发展起来的。此方法的基本原理是采用 BioRad Chelex 100（一种螯合剂）提取DNA。此方法简便、快速，提取后的DNA 样品可以直接作为PCR 的模板。具体的操作步骤如下：
（1）取一小块冰冻的组织（少于1mg，可用经消毒的枪头钻取），或1～3 根带有毛根的毛发（需先经 90％、70％的乙醇和灭菌水依次清洗，并剪去毛干部分），或 1～5μl 血液，加入经过高温消毒的离心管中。离心管内事先加入 500μl 5％的Chelex 溶液。
（2）将样品管在56℃下放置1 小时或更长时间，直至组织样品成粉末状（不同组织所需时间各不相同）。
（3）在振荡器上振荡10～15 秒钟。
（4）在 95～100℃下煮 15～40 分钟。
（5）在振荡器上振荡10～15 秒钟。
（6）将样品管在4℃下保存，进行PCR 反应之前再次离心，使Chelex 颗粒沉淀。取上清液（1～10μl）作为DNA 模板。
7．2．3 陈旧、古老DNA 样品的提取方法
对于陈旧、古老DNA 的研究始于80 年代中期。1985 年，Paabo 采用克隆的手段首次从古
埃及木乃伊中提取并测定了一段DNA 序列。然而，较为广泛地开展对古老DNA 的研究是在多
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