Pyrosequencing 在肿瘤基因甲基化研究的应用

甲基化研究对于基因的调控和肿瘤的发生有非常密切的关系。在一般正常的细胞中，基因调控区CpG岛处于非甲基化的状态。而当细胞发生癌变后，这些CG区域往往呈现甲基化状态。英国医学刊物《Lancet》报道奥地利因斯布鲁克医学院的专家们早就可以通过检测大便中DNA的甲基化变化，把健康人的大便与结肠癌患者的大便区分开。大便标本中SFRP2 甲基化的程度是诊断结肠癌最灵敏的标记。研究人员发现，肿瘤的发生以及一些遗传病的出现和基因甲基化有非常密切的关系。目前DNA甲基化研究是肿瘤分子生物学研究的一个重要领域。

Pyrosequencing技术作为一种新的序列分析技术，能够快速地检测甲基化的频率，对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测，为甲基化研究提供了新的途径。Pyrosequencing是一种通过合成方法进行序列分析的方法，它通过核苷酸和模板结合后释放的焦磷酸引发酶级联反应，促使荧光素发光并进行检测。这项技术曾经被用作单核苷酸多态性（SNP）的基因型和单倍型的检测，以及细菌和病毒的鉴定和分型研究。这项技术的一个主要特点是在Pyrogarm™软件上显示的峰值高度来自于序列分析的原始数据，通过峰值的高度可以精确的检测混合DNA模板中等位基因的频率。

Pyrosequcing系统可以获得以下结果：

1 那些DNA序列位点发生甲基化？

2 每个位点的甲基化程度是多少？

3 这些位点的甲基化和疾病的相关性？

参考文献：

1． http://www.ebiotrade.com/emgzf/genenews200404/gene5.htm

2． Colella S., Shen L., Baggerly K.A., Issa J.-P.J., Krahe R. Sensitive and quantitative universal Pyrosequencing methylation analysis of CpG sites. BioTechniques, Jul 2003; 35: 146-150.

3． Dupont JM, Tost J, Jammes H, and Gut IG. De novo quantitative bisulfite sequencing using the pyrosequencing technology. Anal Biochem, Oct 2004; 333(1): 119-27.

4． Kiss, C., Nishikawa, J., Takada, K., Trivedi, P., Klein, G., Szekely, L. T cell leukemia I oncogene expression depends on the presence of Epstein-Barr virus in the virus-carrying Burkitt lymphoma lines.PNAS, 2003; 100(8): 4813-4818.