将一定量的黄鳝血液经一定倍数的等渗盐水稀释后，置于血细胞计数盘的计数室内，计数一定容积溶液内的红细胞，然后再推算出1 mm或1L血液内的红细胞数。
在医学临床上已使用仪器——血液多参数自动测量仪，这使血细胞计数工作完全自动化。
Get certain amount of eel’s blood and dilute with isotonic brine. After dilution, put a little diluted liquid in to the cell of counting plate. Calculate the erythrocyte number in certain solution and deduce the amount of erythrocyte in 1mm or 1L blood.
In clinic, blood multi-parameter auto-calculator has been developed, which makes the task of counting erythrocyte much easier and totally automatic.
[关键词] 红细胞 计数
erythrocyte calculation
[仪器]
血细胞计数板、一次性定量毛细取血管(20μl)、移液管(1 ml、2 ml、5 ml)、滴管、小试管、显微镜、玻璃棒。
[试剂类型]
75％酒精棉球、红细胞稀释液。
[实验步骤]
1．采血及稀释
用5 ml移液管吸取3.98 m1红细胞稀释液并放人1号小试管中备用。
采黄鳝背血管内血液，注入用抗凝剂润洗过的小试管内。准确吸取20μl，将滴管插入放有上述盛有稀释液的试管底部，轻轻吹出血液，并用上清液清洗毛细吸血管2～3次，轻轻摇动试管1～2 min，使血液与稀释液充分混匀。
2．血细胞计数板
计数板是一块刻有一定面积刻度的长方形厚玻璃板。
计数板通常有前后两个计数室，每室划分9个大格，格与盖玻片的距离为0．1 mm，每大格边长为1 mm，面积为l mm2，体积为0．1 mm3。四角的4个大方格被划分为16个中方格，一般此4个大方格用作白.
细胞的计数：中央大方格中的每一个中方格被3条等分的线条划分，故中央大方格共得25个中方格，每个中方格边长为0．2mm，面积为0．04 mm2，体积为0．004mm3，每个中方格又得16个小方格，—般情况下，中央大方格四角的和中央的中方格及其内部的小方格用作红细胞的计数。
将盖玻片(与计数板同时配套购置)放人计数板中央，用洁净玻璃棒蘸取少量已稀释混匀后的血细胞悬浮液，于盖玻片边缘一次性滴人计数室内，使之灌满，静置2～3 min后，待细胞下沉后进行计数。
3．计数方法
用低倍镜巡视计数室内被计数的特定血细胞分布是否均匀，分布均匀者方可计数。
计数红细胞 ： 把计数室中央的大方格置于视野内，转用高倍镜，计数5个中方格(中央大方格四角的和正中的5个中方格)内的红细胞总数。计数时必须遵循一定方向逐格进行，如将上侧和左侧线上的红细胞数人，则勿将下侧和右侧线上的数入。
4. 计算原理：
1) 加20μl (即0．02ml)血液于3．98 ml红细胞稀释液中，使血液稀释200倍。
2) 共计数0．02μl稀释后血液中的红细胞总数(一个中方格的容积为0．2X 0．2X 0.1= 0．004mm3；5个中方格的容积为0．004X 5=0．02mm3，换算成每mm3时应乘以50，，
3) 红细胞数／mm3=5个中方格中所数的红细胞数X稀释倍数(200)X 50。
[实验结果]
红细胞数／mm3=5个中方格数得的红细胞总数X104=280X104=2.80X106
红细胞数／L=红细胞数／mm3X106=2.80X106 X106=2.8X1012
[讨论]
1． 人体红细胞的正常参考值：
男性：4.5 ~ 5.5 X 1012 / L
女性：3.8 ~ 4.6 X 1012 / L
新生儿：6.0 X 1012 / L 以上
2． 红细胞的基本功能：
红细胞的主要功能是运输O2和CO2。在红细胞的参与下，血浆运输CO2的能力约为直接溶解于血浆中的18倍。
红细胞内有多种缓冲对和碳酸酐酶，也具有一定的缓冲酸碱度的能力。
3． 在操作过程中有可能影响红细胞计数的主要因素有：
取样时样品不纯洁， 掺杂了组织液等其他杂质；
放置时间过长，或者由于抗凝剂的用量不足或者忘记加入抗凝剂，血液在计数前已经出现了凝血现象等；
血液与稀释液没有混合均匀，或者取样部位不合适，导致计数结果有误差；
没有熟练的掌握血细胞计数方法，计数产生认为因素的偏差。
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