【实验目的】
练习并掌握果蝇三龄幼虫唾腺的剖离技术,掌握唾腺染色体标本的制备方法。
【实验原理】
果蝇唾腺染色体是处于细胞同源染色体的配对状态,它们的巨大性是由于垂直分裂后的众多染色线没有分开的结果。因此又称为多线染色体。由于每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一,因而出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。不同染色体的横纹数量、形状和排列顺序是恒定的。利用这些特征不仅可以鉴定不同的染色体,还可以结合遗传实验结果进行基因定位。
【器材与试剂】
一、器材
显微镜、双筒体视显微镜、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸
二、试剂
生理盐水(0.7%NaCl溶液)、改良品红、1N 盐酸
【实验步骤】
1、幼虫的培养 选择肥大的三龄幼虫
2、剖离唾腺。载玻片上滴加生理盐水一滴,取三龄幼虫放在其中,两手各持一解剖针,用一支压在虫体中部的稍后处,不使移动,另一支按在头部黑点处(口器)稍后,轻缓地向前移动,可将头部扯开,头部也随之拉出。这时可以看到一对透明而微白的长形小囊,即唾腺。
2.解离:用1N HCL处理5—8分钟。
3.染色:用蒸馏水涮洗一下唾腺,用改良苯酚品红染色15—20分钟。
4.压片:盖上盖玻片。吸水纸放在盖玻片上,用拇指轻轻在吸水纸上用力,使材料分散均匀。再用铅笔头或解剖针垂直轻敲。注意勿使盖玻片移动。
6、镜检:低倍镜下观察,选出典型细胞,再于高倍镜下观察。
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