分装到 5 个经高温灭菌的培养瓶内,塞好棉塞备用。注意在分装时不要把培养基倒在瓶壁上。刚配制完的培养基放凉后在瓶壁上会有许多水滴,这时如果把果蝇放进去,水滴可能将果蝇的翅膀粘住,为避免发生此事,可将配好的培养基放在温箱内 2 ~ 3d ,待水分蒸发后再使用,或用酒精棉将瓶壁上的水分擦掉,然后插入消毒过的吸水纸 ( 作幼虫化蛹时的干燥场所 ) 。 丙酸的作用是抑制霉菌污染,每 200 毫升饲料约加 1 毫升左右。如无酵母粉,也可用酵母液代替,但用法不同。若用酵母菌液则在饲料分装到培养瓶中以后再加入,每瓶加数滴。
2. 普通果蝇的生活史及形态观察
1 )生活史观察
①卵 成熟的雌蝇交尾后( 2 ~ 3d )将卵产在培养基的表层。用解剖针的针尖在果蝇培养瓶内沿着培养基表面挑取一点培养基将其置于载玻片上,然后滴上 1 滴清水,用解剖针将培养基展开后放在显微镜低倍镜下仔细进行观察。果蝇的卵为椭圆形,长约 0.5mm ,腹面稍扁平,前端伸出的触丝可使卵附着在培养基表层而不陷入深层。
②幼虫 果蝇的受精卵经过一天的发育即可孵化为幼儿虫。幼虫在培养基内及瓶壁上都有,培养基内的幼虫一般要小一些。这是因为果蝇的幼虫从一龄幼虫开始经两次蜕皮,形成二龄和三龄幼虫,随着发育而不断长大,三龄幼虫往往爬到瓶壁上来化蛹,其长度可达 4 ~ 5mm 。幼虫一端稍尖为头部,黑点处为口器。幼虫在培养基内和瓶壁上蠕动爬行。
③蛹 幼虫经过 4 ~ 5d 的发育开始化蛹。一般附着在瓶壁上,颜色淡黄。随着发育的继续,蛹的颜色逐渐加深,最后为深褐色。在瓶壁上看到的几乎透明的蛹是已经羽化完而遗留的蛹的空壳。
④成虫 刚羽化出的果蝇虫体较长,翅膀也没有完全展开,体表未完全几丁质化所以成半透明透乳白色。随着发育,身体颜色加深,体表完全几丁质化。羽化出的果蝇在 8 ~ 12h 后开始交配,成体果蝇在 25 ℃ 条件下的寿命为 37d 。
2 )雌雄鉴别
为了准确地配制果蝇的杂交组合和果蝇遗传性状分析,必须首先能够正确辨别果蝇的性别。
①麻醉 对果蝇实施麻醉是为了便于性状观察和转移果蝇,因此麻醉时一定要根据实验目的的而确定麻醉的深度。如果只是进行观察,可以将果蝇麻醉至死。死亡时表现为翅膀与身体呈 45 度角。但如果是麻醉鉴别后再进行转移培养,就应避免麻醉至死。麻醉时,在麻醉瓶的瓶盖内塞入沾有乙醚的棉花,待乙醚气体在瓶内充满后将果蝇培养瓶的瓶口与麻醉瓶口对准,将果蝇转入麻醉瓶内,盖好瓶盖。观察果蝇的表现,若果蝇从瓶壁上纷纷落到瓶底,表示麻醉已生效。转移麻醉后的果蝇时,应用毛笔的笔尖粘取。
②将麻醉后的果蝇放在解剖镜下仔细观察,区别雌雄的差异。
可以着重从以下几方面观察雌雄果蝇主要差异,见表 4-1 。
表 4-1 雌雄果蝇主要差异比较
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雌蝇
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雄蝇
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体型较大
腹部椭圆型末端稍尖
腹部背面 5 条黑纹
无性梳
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体型较小
腹部末端钝圆
腹部背面 3 条黑纹
最后一条延伸至腹面成一黑斑
第一对足第一跗节有性梳
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在雌雄差异中,以性梳的差异最为准确。如刚羽化出的果蝇(图 4-3 ),身体都较和长,颜色很浅。但是,用性梳的有无就可以很快将雌雄分开,在熟练操作几次后,就可以不必借助解剖镜也能很快区分雌雄。在观察性梳时可以用解剖镜观察,也可以用低倍的显微镜观察。
3) 突变型观察
将果蝇麻醉后,在解剖镜下仔细辨认各种突变类型。与野生型果蝇作对照,观察突变型果蝇的性状表现,如残翅、黑身、黄身、白眼等。经过一段时间的练习,可以直接区别各种不同性状。
果蝇中的一些突变性状和控制该性状的基因如表 4-2 。
表 4-2 果蝇中的一些突变性状及控制流性状的基因
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突变型
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基因符号
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表现特征
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基因所在染色体
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白眼
褐色眼
猩红眼
黑檀体
黄体
焦毛
黑体
残翅
翻翅
短翅
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w
bw
st
c
y
sn
b
vg
Cy
m
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复眼白色
复眼褐色
复眼猩红色
身体乌木色
身体浅橙黄色
刚毛卷曲烧曲焦状
颜色比黑檀体深
翅退化,不能飞
翅向上翻卷,纯合致死
翅膀短小,不超过身体
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