一、实验材料
1、无钙，镁离子Hank’s液
2、胶原蛋白酶（0.01％）和透明质酸酶（0.001％）
3、6孔细胞培养版(Costar)
4、10％FCS培养基MEM（GIBICO）
二、实验方法
1.胶原蛋白酶（160unit/mg）/透明质酸酶 500 I.E. /mg.
2.胶原蛋白酶（0.01％）和透明质酸酶（0.001％）用无钙，镁离子Hank’s液溶解(GKN-buffer)。
3.将鸡胚绒毛尿囊膜取出，放入装有PBS的平皿内，经洗涤过两次后，放入青瓶内，在青瓶内剪碎。
4.剪碎后，移至另一个干净的100mL三角锥瓶内。用无钙，镁离子的PBS液，悬浮洗涤（摇晃即可），静置，直至上清液澄清。
5.重复4步骤5－7遍。
6.组织块用无GKN－buffer, 在室温下振荡25min, 使之与酶充分接触。随后，放入水浴里，37℃，10min.
7.静置，吸出上清液。
8.用0.2％胰酶和0.4％EDTA的buffer(versene-buffer)，在室温，振荡50－60min。
9.在残留物去除后，用上清液去离心（400g,4min）。
10.离心后，弃掉上清，用versene-buffer重新悬起。再次离心后，细胞含10％FCS的MEM重新悬起。分装入细胞培养板中，置CO2培养箱中培养。
三、个人经验
在用酶消化的过程中，一定要注意控制好消化时间，以免造成细胞损失太多，并且无法贴壁。
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