细胞电融合方法-试验方案

⁵个。

4、如做同种细胞间融合，可取有关细胞悬液1ml,加入50%的PEG液混匀，置于30℃水浴内温育lO-15min；如采用异种细胞融合(如鸡红细胞与腹水瘤细胞)，可分别取0.5ml，再加入0.5miGKN液一起混匀，其它步骤同上。

5、用吸管或移液器吸取以上细胞悬液0.1--0.2ml，滴在薄底小培养皿中，利用倒置显微镜进行观察。

四、结果

在倒置显微镜下可观察到由同种细胞融合形成的细胞，称为同核体 (homokaryons)，利用不同亲本的不同细胞彼此融合所形成的细胞，称为异核体 (heterokaryons)，还可观察到3个以上细胞融合在一起的合胞体。

细胞融合率系指在显微镜的视野内，已发生融合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，称为融合率，通常以百分比表示，而且要进行多个视野测定，再加以平均统计，更为准确。

作业

1、绘图表示所观察到的融合细胞．

2、请写出细胞电融合的注意事项．

思考题

1、说明细胞电融合的原理．

2、在细胞电融合中，设对细胞产生可逆性电击穿的总能量为Q，如何理解各项电参数之间及其与Q值的关系?