一、实验目的
学习用光用显微镜观察植物细胞内骨架的基本方法
了解植物细胞的骨架的结构特征．
二、实验原理
当用适当浓度的Triton X-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞内骨架系统的蛋白质却被保存，后者有考马斯亮蓝R250染色，可在光学是显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、实验用品
(一)材料
洋葱鳞茎
(二)器材
显微镜，5ml烧杯，胶头滴管，容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
试剂
（1）M-缓冲液：50mmol/L味唑、50mmol/L KCJ、0.5mmol/LMgCl2、mmol/L EGTA 、0.1mmol/LEDTA、1 mmol/L巯基乙醇。
（2）6mmol/L pH6.8磷酸缓冲液，用NaHC03调pH)。
（3）1%TritonX-1OO，用M-缓冲液配制。
（4）O.2%考马斯亮蓝R250，其溶剂是：甲醇46.5ml，冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml。
（5）3％戊二醛，用磷酸缓冲液配。
（6）50％、70％、95％乙醇。
（7）叔丁醇。
（8）正丁醇。
（9）二甲苯。
（10）中性树胶。
四、实验方法
（1）撕取洋葱鳞茎内的表皮缅胞（约1cm2大小若干片）置于装有pH6.8磷酸缓冲液的5ml烧杯中，使其下觉。
（2）吸去磷酸缓冲液，用1%Triton X-100处理20-30分钟。
（3）吸去Triton X-100,用M-缓冲液洗三次，每次10分钟。
（4）3％二醛固定0.5--1小时．
（5）pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次10分钟。
（6）0.2％考马斯亮蓝R250染色20--30分钟，
（7）用蒸馏水洗1--2次，细胞置于载玻片上,加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。
（8）如观察装什效果好，可制作成永久装片．
在样品的5mt烧杯中，按顺序通过如下药物：50％乙醇、70％乙醇，90％乙醇、1/295％7醇+1/2叔丁醇、叔丁醇(每级5--10分钟)；或正丁醇→二甲苯→二甲苯→二甲苯(每级5--10分钟)，然后捞取样品，平展于载玻片上，经镜检，效果好，可加一滴中性树胶，盖上盖玻片。
上一篇：PSA反应法显示多糖 下一篇：植物染色体标本的制备与观察
