• GUS基因检测

• 点击：    作者：   来源： 日期：2007-12-03    本站论坛

一、   仪器设备：恒温箱、超净工作台

二、   器具：1.5ml的塑料管、镊子、解剖刀等

三、   材料：转化的愈伤组织

四、   试剂及其配制：

50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0）：A液：取NaH₂PO₄.2H₂O 3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。 B液：取Na₂HPO₄.12H₂O 7.17g溶于蒸馏水，定溶100ml。取A液39ml与B 液61ml混合，定容至400ml，调PH至7.0。

 

50mmol/L铁氰化钾母液：称3.295g，用蒸馏水定容至200ml

 

50mmol/l亚铁氰化钾母液：称4.224g ，用蒸馏水定容至200ml。

 

 

0.5mol/l EDTA母液（pH8.0）：

药品                         分子量        100ml           500ml

EDTA Na₂ 2H₂O    372.24             18.6g            93.06g

双蒸H₂O                        80ml            400ml

用NaOH调PH至8.0             6g              10g

DdH₂O定容至                   100ml           500ml

 

GUS检测液的配制：甲醇、Gluc、DMF

100mgGluc，先溶于1ml的DMF。取80ml 50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH 7.0），加入1ml 50mmol/L铁氰化钾、1ml 50mmol/L亚铁氰化钾和2ml 0.5mol/l EDTA（PH 8.0），再加入已溶解的Gluc，再加20ml的甲醇，混匀。（配制方法参考《现代植物生理学实验指南》p348）

将配好的GUS检测液分装于1.5ml的塑料管中（1ml/管，1组1管），－20°C保存备用。

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